Что такое бактериологическое исследование, как оно проводится, расшифровка результатов. Что такое бак посев. Назначение бактериологических посевов




БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ , ыи- кробиологич. анализ, служит для обнаружения различного рода микроорганизмов и определения их вида в подлежащем обследованию материале (в почве, воде, продуктах разного рода, отделениях животных и т. д.); состоит в изучении биологии микроба (его морфологических, биолог, и иммунологических свойств), а для патогенных микробов также и в определении их способности вызывать у экспериментальных животных специ-фич. пат. процессы. Изучение морфологии микробов производится при помощи микроскопа, для чего материал, подлежащий обследованию, подвергается предварительной обработке с тем, чтобы сделать микробов ясно видимыми среди неорганизованного распада, в к-ром они обычно находятся. Достигается это окрашиванием препаратов из исследуемого материала различными естественными или искусственными красками. Так как мертвые микробы окрашиваются 6»1 лучше, то препараты предварительно подвергаются т. н. фиксированию, т. е. обработке разного рода физич. и хим. агентами, быстро убивающими протоплазму-■ жаром, спиртом и т. д. Иногда материал микроеко-пируется и без предварит, обработки, когда требуется по ходу анализа изучение под микроскопом живых микробов (наблюдение подвижности их, отношения к О и пр.). В таких случаях приготовляется препарат в виде т. н. висячей капли. Наблюдение ведется или обычным способом или при затемненном поле зрения микроскопа. При исследовании на присутствие Protozoa весь анализ ограничивается одним микроскопированием, что считается достаточным, т. к. методы культивирования протозоа очень сложны и в широкую практику еще не вошли. В бактериологии анализ не останавливается на изучении формы микроба. Необычайно широкая изменчивость бактерий при ничтожнейших изменениях окружающей среды, прежде всего отражается на форме их; изучение только одной формы микробов привело бы к грубейшим ошибкам при определении их вида. Поэтому, для суждения о виде микроба необходимо знание, кроме морфологии,-и всех его биол. особенностей, его биохим. и иммунологических свойств, а для патогенных-и результата опыта на животном; только совокупность всех этих данных дает возможность б. или м. точно идентифицировать того или иного микроба, определить вид и тип его. Этому и служит вся бактериологическая техника. Культивирование микробов на искусственных питательных субстратах для изучения их биохим. свойств является главнейшим моментом Б. а. В настоящее время такое культивирование встречает еще ряд затруднений. Многих микробов и теперь еще нельзя получить в искусственных культурах. Препятствием служит ряд условий, заключающихся в необычайном разнообразии микробного мира, в резко выраженной специфичности биохим. функций микробов и вытекающей отсюда их изменчивости. Наше незнание многих из этих условий не дает возможности подобрать такие питательные среды, к-рые всегда были бы пригодны. Тем не менее, именно культивирование доступных нам микробов является основным методом их Б. а. В наст, время Б. а. начинается с получения отдельных микробов, подлежащих изучению, в чистых культурах, т. е. в культурах, состоящих из одного вида микроба, без примеси какого-либо другого. Достигается это тем, что материал, подлежащий изучению, распределяется на поверхности твердых питательных сред. Это распределение имеет целью отделить микробов друг от друга. Через известный период времени, чаще всего через сутки, на тех местах субстрата, на которых оказались микробные клетки, образуются скопления микробов, т. н. колонии разросшегося микроба. Эти колонии у многих микробных видов имеют очень характерную форму, чем и пользуются для первого ориентирования в составе микробной флоры. Отдельные колонии извлекаются и переносятся на подходящие питательные среды для дальнейшего культи- вирования. Предполагается, что каждая колония вырастает из одной клетки; но это бывает не всегда, и последнее время все больше и больше в практику входит способ получения колоний из заведомо одной микробной клетки. Такое отделение микроба производится под контролем глаза в микроскопе с помощью прибора, называемого микроманипулятором. Т.к. материал, подлежащий обследованию, заключает в себе огромное количество разнообразных микробов, выделить же необходимо одного определенного из них, то в таких случаях применяются особые питательные среды. В последних или содержатся хим. вещества, вступающие между собой во взаимодействие под влиянием роста микробов, что обнаруживается каким-либо легко доступным проявлением, напр., изменением цвета, выпадением или растворением осадка (среды Эндо, Дригальского, среды с мелом, с кровью), или эти среды заведомо благоприятствуют росту искомого микроба и подавляют рост микробов сопутствующих, напр., среды обогащения для тифа, дифтерии. Только после такой предварительной обработки получают чистые культуры. В тех случаях, когда искомый микроб находится в исходном материале в очень незначительном количестве и трудно поддается непосредственному культивированию, прибегают к опыту на животных (tbc). Материал впрыскивают животному, и после того, как разовьются характерные для данного микроба пат. изменения, выделяют чистую культуру. Получив чистую культуру, приступают к изучению биохим. особенностей данного микроба. Т. к. состав питательных сред очень сложен, то для изучения биохимии к средам прибавляются различные, химически более простые вещества, изменения которых под влиянием роста микробов легко могут быть обнаружены прибавлением какого-либо индикатора-лакмуса,нейтраль-рота и др. Для этой цели служат различные углеводы, моно-, ди-, полисахариды и многоатомные спирты, а также желатина и кровь (эритроциты). На основании изменения того или иного из этих веществ заключают о биохимич. особенностях данного микроба. Громадное значение при определении вида микроба имеет иммунологический метод, основанный на способности животного организма крайне специфически реагировать на парэнтеральное введение инородных белков образованием и накоплением в крови различных т. н. антител. Сыворотка крови таких животных и служит реактивом. В ней присутствие этих антител легко может быть обнаружено рядом простых реакций. Некоторые из этих реакций получили широкое распространение и являются обязательными при идентификации микробных видов. Эти реакции-агглютинация, преципитация и реакция отклонения комплемента. Для непатогенных микробов Б. а. на этом может быть закончен. Для микробов же патогенных обязателен еще эксперимент на животном, особенно при обнаружении нового вида. Идеалом определения всякого патогенного микроба является получение у подходящего животного патологич. изменений, вызываемых данным микробом в естеств. условиях. Однако, наши знания необходимые для такого опыта условий далеко не полны, почему опыты и бывают часто безуспешными. Затем, пат.-анат. данные, полученные в результате опыта, не всегда могут быть достоверны, т. к. видимое здоровое состояние животного ничего не говорит о перенесенных им инфекциях и друг, заболеваниях; обнаруженные изменения, могут быть результатом уже ранее перенесенных заболеваний. Все эти соображения заставляют очень осторожно относиться к получаемым при эксперименте результатам и никогда не удовлетворяться одним удачным опытом. Все же в тех случаях, где реакция со стороны опытного животного по отношению к данному микробу строго определенна и постоянна (как, напр., отношение морской свинки к дифтерии или tbc, или кролика к оспе и бешенству), там эксперимент на животном является обязательным. Б. а. без такого эксперимента недостаточно убедителен. В нек-рых случаях при удачном опыте необходимо выделить в чистой культуре того микроба, который послужил для эксперимента, и идентифицировать его с исходным. Это необходимо потому, что часто введение в животный организм инородного материала пробуждает дремлющие там патогенные процессы и вызывает генерализацию ограниченного страдания, повышая активность находящихся там микробов. При выделении чистой культуры надо поэтому иметь в виду, что можно выделить не исходного микроба, а микроба, случайно находившегося в организме. Кроме того, кровь многих, видимо здоровых, животных содержит в себе различных микробов, к-рые также могут быть выделены и могут ввести в заблуждение исследователя. Общая схема хода Б. а. может быть представлена в таком виде: 1) изготовление препаратов из подлежащего обследованию материала; фиксация их; 2) микроскопирова-ние а) в неокрашенном виде, б) в окрашенном виде; 3) посев на агаровые пластинки для выделения чистой культуры; если необходимо, то после предварительного посева на избирательные или обогащающие среды; 4) биохим. анализ; 5) реакции иммунитета; 6) эксперимент на животных. Целью Б. а., кроме определения вида бактерии, служит и установление его места в систематике микробов. Однако, систематика микробов еще недостаточно разработана, вернее, существует несколько систематик, очень неполных, построенных на различных основах. Все это затрудняет точность анализа. В 1917 г. американские микробиологи создали специальную комиссию, к-рая и разработала систематику бактерий, базируясь, гл. обр., на их иммуно-биологических особенностях и свойствах, обнаруживаемых в культурах. Эта комиссия проверила характеристики всех известных микробов в указанном выше смысле, и результаты ее работ опубликованы. Все выходящие теперь на англ. яз. работы уже придерживаются номенклатуры, принятой в этом руководстве. Лит.: Златогоров С. И., Учение о микроорганизмах, П., 1914; Т а р а с е в и ч Л. А., Ме- дицинская микробиология, Киев, 1910; Омелян-с к и й В. Л., Основы микробиологии, М.-Л., 1926; К о 1 I e W. u. Wassermann A., Handbuch d. path. Mikroorg., В. I, 2 Ausg., Jena, 1912; К о 1 m e r J., Infection, immunity a. biologic therapy, L., 1924; Bergey H., Manual of determinative bacteriology, L., 1927; P a r k W. a. Williams A., Pathogenic microorganisms, N. Y., 1925; В e s s о n A., Technique microbiologique, P., 1925; Wadsworth A., Standard methods, N. Y., 1927.А. Челышй.

Исследование бактерий имеет большое практическое значение для человека. На сегодняшний день открыто большое количество прокариот, которые отличаются друг от друга по патогенности, области распространения, форме, размерам, количеству жгутиков и другим параметрам. Чтобы детально изучить данный штамм, применяется бактериологический метод исследования.

Какие существуют методы клеток?

Чтобы определить, являются ли бактерии патогенными, проводят исследование культуры различными способами. Среди них:

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологический метод.

3. Биологический метод.

Бактериоскопический и бактериологический основаны непосредственно на работе с клетками прокариот, когда биологический анализ требуется для изучения влияния таких клеток на живой организм подопытных животных. По степени проявления тех или иных признаков заболевания ученый может сделать вывод о наличии или отсутствии патогенных бактерий в пробе, а также естественно их размножить в организме животного для получения их культуры и использования в других работах.

Бактериологический метод исследования отличается от бактериоскопического. В первом для анализа используется специально подготовленная культура живых прокариот, когда во втором проводится работа с мертвыми или живыми клетками на предметном стекле.

Этапы бактериологического метода исследования. Микробиология

Принцип изучения свойств бактериальной культуры может пригодиться как для ученых-микробиологов, которые поставили цель исследовать прокариотические клетки, так и для лаборантов, задача которых заключается в установлении патогенности или непатогенности бактерий, а затем диагноза пациента.

Методика изучения бактерий делится на три этапа:

1. Выделение бактерий из первоначальной пробы.

2. Высевание бактерий и выращивание изучение ее свойств.

3. Детальное исследование бактериальных клеток.

Первый этап

Проба, или мазок, берется со свободной поверхности среды или у пациента. Таким образом мы получаем «коктейль» из множества видов бактерий, которые должны высеять на питательную среду. Иногда появляется возможность выделить сразу необходимые бактерии, зная их очаги распространения в организме.

Через двое-трое суток отбираются нужные колонии и высеваются на твердые среды чашек Петри с помочью стерильной петли. Во множестве лабораторий работают с пробирками, где может находиться твердая или жидкая питательная среда. Так и проводится бактериологический метод исследования в микробиологии.

Второй этап

После получения отдельных колоний бактерий проводится непосредственный макро- и микроанализ. Измеряются все параметры колоний, определяется цвет и форма каждой из них. Нередко проводится подсчет колоний на чашке Петри, а затем в исходном материале. Это имеет значение при анализе патогенных бактерий, от числа которых зависит степень заболевания.

Бактериологический метод исследования, 2 этап которого заключается в изучении отдельных колоний микроорганизмов, может быть сопряжен с биологическим способом анализа бактерий. Еще одна цель работы на этом этапе - увеличить количество исходного материала. Это можно сделать на питательной среде, а можно провести эксперимент в естественных условиях на живых подопытных организмах. Патогенные бактерии будут размножаться, и в результате кровь будет содержать миллионы клеток прокариот. Из взятой крови легко приготовить необходимый рабочий материал бактерий.

Третий этап

Самая важная часть исследования - это определение морфологических, биохимических, токсигенных и антигенных свойств культуры бактерий. Работа ведется с заранее «очищенными» культурами на питательной среде, а также с препаратами (зачастую окрашенными) под микроскопом.

Установить принадлежность патогенных или условно-патогенных бактерий к той или иной систематической группе, а также определить их устойчивость к лекарствам позволяет бактериологический метод исследования. 3 этап - антибиотики, т. е. анализ поведения клеток бактерий в условиях содержания лекарственных препаратов в окружающей среде.

Исследование устойчивости культуры к антибиотику имеет важное практическое значение, когда необходимо прописать для конкретного пациента необходимые, а главное, действенные препараты. Здесь и может помочь бактериологический метод исследования.

Что такое питательная среда?

Для развития и размножения бактерии должны находиться в заранее подготовленных По консистенции они могут быть жидкие или твердые, а по происхождению - растительные или животные.

Основные требования к питательным средам:

1. Стерильность.

2. Максимальная прозрачность.

3. Оптимальные показатели кислотности, активности воды и других биологических величин.

Получение изолированных колоний

1. Метод Дригальского. Он заключается в том, что на бактериальную петлю наносится мазок с различными видами микроорганизмов. Этой петлей проводят по первой чашке Петри с питательной средой. Далее, не меняя петлю, методом остаточного материала проводят по второй и третьей чашкам Петри. Так, на последних образцах колонии бактерии будут засеваться не слишком плотно, тем самым упрощается возможность найти необходимые для работы бактерии.

2. Метод Коха. В нем используются пробирки с расплавленной питательной средой. Туда помещается петля или пипетка с мазком бактерий, после чего содержимое пробирки выливается на специальную пластинку. Агар (или желатин) застывает через какое-то время, а в его толще легко обнаружить нужные колонии клеток. Важно перед началом работы развести смесь бактерий в пробирках, чтобы концентрация микроорганизмов не была очень большой.

Этапы которого основаны на выделении нужной культуры бактерий, не обходится без этих двух способов нахождения изолированных колоний.

Антибиотикограмма

Визуально реакцию бактерий на препараты можно заметить двумя практическими способами:

1. Метод бумажных дисков.

2. Разведение бактерий и антибиотика в жидкостной среде.

Метод бумажных дисков требует наличия культуры микроорганизмов, которые были выращены на твердой питательной среде. На такую среду кладут несколько бумажек округлой формы, пропитанных антибиотиками. Если препарат успешно справляется с нейтрализацией бактериальных клеток, после такой обработки останется участок, лишенный колоний. Если же реакция на антибиотик отрицательная, бактерии выживут.

В случае использования жидкой питательной среды сперва готовят несколько пробирок с культурой бактерий разных степеней разведения. В эти пробирки добавляют антибиотики, и в течение суток наблюдают за процессом взаимодействия вещества и микроорганизмов. В конечном итоге получается качественная антибиотикограмма, по которой можно судить об эффективности препарата для данной культуры.

Основные задачи анализа

Здесь перечислены по пунктам цели и этапы бактериологического метода исследования.

1. Получить исходный материал, который будет использоваться для выделения колоний бактерий. Это может быть мазок с поверхности любого предмета, слизистой оболочки или полости органа человека, анализ крови.

2. на твердой питательной среде. Через 24-48 часов на чашке Петри можно обнаружить колонии бактерий разных видов. Отбираем по морфологическим и/или биохимическим критериям нужную и проводим уже с ней дальнейшую работу.

3. Размножение полученной культуры. Бактериологический метод исследования может опираться на механический или биологический способ увеличения численности культуры бактерии. В первом случае ведется работа с твердыми или жидкими питательными средами, на которых в термостате размножаются бактерии и образуют новые колонии. Биологический способ требует естественных условий увеличения численности бактерий, поэтому здесь микроорганизмами заражается подопытное животное. Через несколько суток в пробе крови или мазке можно обнаружить множество прокариот.

4. Работа с очищенной культурой. Чтобы определить систематическое положение бактерий, а также их принадлежность к возбудителям заболеваний, необходимо провести тщательный анализ клеток по морфологическим и биохимическим признакам. При исследовании патогенных групп микроорганизмов важно знать, насколько эффективно действие антибиотиков.

Это была общая характеристика бактериологического метода исследования.

Особенности проведения анализа

Главное правило проведения бактериологического исследования - это максимальная стерильность. Если идет работа с пробирками, посевы и пересевы бактерий должны проводиться только над нагретой спиртовкой.

Все этапы бактериологического метода исследования требуют использования специальной петли или пастеровской пипетки. Оба инструмента должны быть предварительно обработаны в пламени спиртовки. Что касается пастеровской пипетки, то тут перед термической стерилизацией необходимо отломать кончик пипетки пинцетом.

Техника посева бактерий тоже имеет свои особенности. Во-первых, при посеве на твердые среды проводят бактериальной петлей по поверхности агара. Петля, конечно же, уже должна иметь на поверхности образец микроорганизмов. Также практикуется посев внутрь питательной среды, и в этом случае петля или пипетка должны достичь дна чашки Петри.

При работе с жидкими средами используются пробирки. Здесь важно следить, чтобы жидкости не касались краев лабораторной посуды или пробки, а используемые инструменты (пипетка, петля) не дотрагивались до посторонних предметов и поверхностей.

Значение биологического метода исследования

Анализ пробы бактерий имеет свое практическое применение. Прежде всего бактериологический метод исследования может использоваться в медицине. К примеру, необходимо изучить микрофлору больного, чтобы установить правильный диагноз, а также выработать правильный ход лечения. Здесь помогает антибиотикограмма, которая покажет активность лекарственных препаратов против возбудителя заболеваний.

Анализ бактерий используется в лаборатории для определения таких опасных заболеваний, как туберкулез, возвратный тиф или гонорея. Также он применяется для изучения бактериального состава миндалин, полостей органов.

Бактериологический метод исследования можно использовать для определения загрязненности среды. По данным о количественном и качественном составе мазка с поверхности какого-либо предмета определяется степень заселенности данной среды микроорганизмами.

Бактериологическое исследование - это исследование, предназначенное для выделения и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза.

Исследуемый материал следует брать в асептических условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию возможно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде. Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.

Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и . Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны.

Для бактериоскопии фиксированных препаратов используют мазки. Для их приготовления каплю исследуемой жидкости распределяют по поверхности предметного стекла, а затем высушивают. Наиболее распространенным методом фиксации препарата является пронесение его через пламя газовой горелки. В некоторых случаях используют фиксирующие составы. Фиксированные препараты, как правило, окрашивают (см. Окраска микроорганизмов). К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы , производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой. Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды. При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки. Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать.

Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация - определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования. Широко используют серологические методы идентификации бактерий (реакции и ). Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.

Для выделения чистых культур используют механические и биологические методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности плотной питательной среды, последовательно в первой, второй и третьей . Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и заключается в их исследовании и отсеве на свежую питательную среду. Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете того или иного свойства выделяемого микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом материале.

При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.

Бактериологическое исследование - комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды. Бактериологические исследования пользуются также для обнаружения условно патогенных и санитарно-показательных микробов, характеризующих степень загрязнения внешней среды, для изучения микробного пейзажа определенной среды (объекта). Бактериологическое исследование может быть использовано для диагностики, профилактики инфекционных заболеваний, для санитарно-гигиенической характеристики среды, окружающей человека, для научного исследования.

Материал и метод бактериологического исследования зависят от цели анализа, условий среды, патогенеза и течения заболевания. При наличии бактериемии микроб обнаруживают при помощи посева крови. В случаях выраженных местных поражений возбудителя следует искать в отделяемом или выделениях пораженного органа (дифтерия, дизентерия, гонорея и др.). Наконец, при заболеваниях со сложным течением, когда (как, например, при брюшном тифе) бактериемия сменяется поражениями тонких кишок, на каждом этапе применяют соответствующий метод исследования: в течение первой недели заболевания производят посев крови, на второй наиболее достоверно серологическое исследование, начиная с третьей недели положительный результат получают при посеве испражнений; последним методом пользуются и в качестве контрольного исследования для обнаружения бактерионосителей среди реконвалесцентов и для наблюдения за ними.

Выполнение любой из указанных задач осуществляют применением методов, предназначенных для выделения и определения микроорганизмов. В зависимости от характеристики микроба используют весь комплекс методов или его части.

Бактериоскопия - наиболее достунный прием, основанный на микроскопическом изучении материала. При микроскопии свежих препаратов можно пользоваться некоторыми микрохимическими реакциями (например, окраска йодофильных бактерий раствором Люголя) или избирательной окраской разных структурных частей бактерий.

Более четко бактерии можно выявить в окрашенном препарате. Исследуемый материал наносят на предметное стекло тонким и по возможности ровным слоем. Дают препарату высохнуть на воздухе и фиксируют одним из общепринятых методов, но чаще всего фламбированием, т. е. двух-, трехкратным быстрым проведением препарата над пламенем горелки так, чтобы стекло было теплое, но не горячее. Препарат, остуженный после фиксации, окрашивают простой или дифференциальной окраской (см. Окраска микроорганизмов). При флюоресцентной микроскопии используют как нативные, так и сухие препараты. В этом случае обработка определенными красителями вызывает свечение структур микробного тела или всего микроба в ультрафиолетовых или коротких синих лучах. В другой модификации микробов обрабатывают специфическими сыворотками, меченными флюоресцентами (красителями). Бактерии, соответствующие сыворотке, будут светиться, так как на них осядет меченая сыворотка. Гетерологичные бактерии не будут светиться.

Методом бактериоскопии широко пользуются для бактериологической диагностики некоторых инфекционных заболеваний (гонорея, туберкулез, возвратный тиф), а также при изучении всего комплекса микрофлоры органа (миндалины, влагалище), продукта или другого объекта.

Метод посева, т. е. выделение чистой культуры искомого микроорганизма, является более точным и надежным способом бактериологической диагностики, чем бактериоскопия. Свежий материал размазывают по поверхности плотной питательной среды, налитой в чашки Петри. Первичный посев производят на обычные среды, благоприятные для данного микроба, на дифференциальные или на селективные среды. Выбор питательной среды (см.), как и метода предварительной обработки свежего материала для посева, зависит от степени его загрязнения сопутствующей посторонней микрофлорой. Через 24-48 час. содержания в термостате при оптимальной для данного микроба температуре чашки рассматривают и подозрительные колонии пересевают на среды, способствующие размножению данного возбудителя. Таким образом получают культуру однородных бактерий, которые и должны быть идентифицированы.

Идентификация микроба начинается с изучения его морфологии в окрашенном препарате и в раздавленной капле (см.) для определения формы микробов и их подвижности. Следующим этапом является исследование ферментативной способности бактерий по расщеплению углеводов, аминокислот, мочевины в определенных для каждого вида сочетаниях. У бактерий наиболее изучены сахаро- и протеолитические ферменты.

Идентификация микроба должна быть дополнена изучением других свойств, характерных для каждого рода и вида микроорганизмов. К таким свойствам относится способность выборочно растворять эритроциты разных животных (гемолиз), свертывать плазму крови (плазмокоагуляция), растворять сгусток фибрина (фибринолиз) и пр. Все эти особенности бактерий могут быть использованы при их определении как дифференциальные признаки.

Окончательное определение микробов некоторых видов, в основном патогенных бактерий семейства кишечных, включает серологическую идентификацию (см. Идентификация микробов). Обычно для этого ставят реакцию агглютинации, т. е. выявляют скучивание бактерий под влиянием одноименной иммунной сыворотки. Агглютинация микробов в сыворотке против определенного вида указывает на принадлежность к этому виду. Обычно реакцию агглютинации ставят ориентировочно на стекле и для окончательного определения в пробирках с разведениями сыворотки.

Ряд микробов не удается определить до конца описанным путем. Тогда идентификацию необходимо дополнить заражением лабораторных животных, поскольку для некоторых бактерий характерна патогенность или токсигенность, выявляющаяся при заражении животных. В некоторых случаях заражение животных служит также методом накопления патогенных микробов.

Только сопоставление всех характеристик культуры, собранных при изучении морфологии, биохимических, серологических, а где нужно и биологических свойств ее, может дать основания для идентификации. Ответ при положительном результате исследования не представляет затруднений, если выделенный микроб типичен. В таком случае указывают род, вид и, если определялся, тип бактерии. При выделении микроба, отклоняющегося по каким-то свойствам от типичной характеристики, дается ответ с указанием на отклоняющийся признак. В таком случае полезно повторить исследование, если позволяет течение болезни или условия сбора материала. Полезно также подвергнуть культуру атипичных микробов дополнительному изучению другими, более сложными методами.

Отрицательные результаты бактериологического исследования имеют относительное значение и показывают лишь, что в исследованной порции материала искомые микробы не содержались или были нежизнеспособны. Однако они могут присутствовать в другой порции. По этому, например, при обследовании на бациллоносительство (брюшной тиф, дизентерия, дифтерия) требуется проводить повторные исследования.

С помощью бактериологического исследования изучаются свойства разнообразных бактерий, благодаря чему устанавливается правильный микробиологический диагноз. С помощью этого метода исследования можно определить заболевание на ранних стадиях его развития.

Для того чтобы провести бактериологическое исследование необходимо взять бакпосев из зева или носа. У представителей мужского пола могут брать сперму на проведение анализа, с помощью которого выявляют трихомонады. Данное исследование не только способно выявлять концентрацию патогенных микроорганизмов в материале, который забирается для анализа. С помощью этого исследования можно исследовать отделяемое половых органов представителей мужского и женского пола, а также ликвоту, кровь и мокроту.

Сырье для бактериологического анализа может браться из:

  • Анального отверстия (калл).
  • Из слизистых оболочек рота, носа и половых органов (зев).
  • Из ран человека.

Благодаря высокому уровню эффективности данного исследования обеспечивается благодаря обнаружению видов грибков и бактерий.

Определение вирусов производится в зависимости от сложности их итиологии. Бактериологическое исследование проводится по назначению врача при подозрении на какое-либо заболевание. Отдельные виды этого исследования производятся регулярно (например, исследование на яйцеглисты производится один раз в год).

Посевы бактериальных культур производятся с помощью бактериологической петли или пастеровской пипетки.

Перед проведением анализа бактериологическая петля поддается стерилизации методом прокаливания пламенем.После этого петля проходит процесс остужения методом прикосновения к незасеянному ангару. Далее этот инструмент ополаскивается в специальной стерильной жидкости.

В том случае, если для исследования используется пастеровская пипетка, то ее кончик необходимо обломать с помощью пинцета. Далее пипетку некоторое время удерживают над пламенем.

Бакпосевы характеризуются использованием жидких и твердых сред. Культура бактерий растирается о поверхность агара. С этой целью используется петля. В том случае, если посев производится в агаровом или желатиновом столбике, то питательная среда прокалывается острой иглой или петлей. В том случае, если производится посев в жидкую среду, то необходимо смотреть, чтобы края пробирки не смачивались этой жидкостью. Если посевы берутся в пробирки, то их нельзя оставлять в открытом положении длительное время, так как это может негативно повлиять на результат исследования.

После того, как посев поместили в пробирку, ее сразу же подписывают. Далее производится идентификация бактериологической культуры. С этой целью изучают биохимические и физиологические свойства бактерий. Очень часто при данном исследовании используется серологический способ идентификации. Высокоэффективным также является биологический метод идентификации. Он заключается в заражении животных материалом, который исследуется. Для того чтобы выделить чистые культуры, применяется метод идентификации.

Виды метода идентификации:

  1. Механический метод идентификации заключается в растирании по поверхности плотной среды исследуемого материала. Для выполнения этого действия чаще всего используется бактериальная петля или стерильный шпатель.
  2. При использовании биологического метода идентификации необходимо создать такую среду, которая будет наиболее благотворна для развития бактерий.

Независимо от метода исследования необходимо использовать только стерильные и термически обработанные инструменты. Благодаря этому можно получить правильные и точные результаты исследования, что даст возможность поставить правильный диагноз и назначить рациональное лечение.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекц. болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, к-рые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептич. условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, осн. клинич. признаки болезни и патологоанатомич. изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 осн. метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патол. или др. исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологич., культурально-биохимич., антигенных и патогенных свойств бактерий.

Б. и. начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патол. материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из др. исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования (см. Окраска микроорганизмов ). Для обнаружения нек-рых бактерий (напр., возбудителя туберкулёза) патол. материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нем концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерии применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12-24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли . Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА.

Выделение культуры бактерий проводят путём посева материала на среды питательные . Чтобы облегчить и ускорить выделение бактерий, используют дифференциально-диагностические и элективные питат. среды (плотные и жидкие), на к-рых определенные виды бактерий дают характерный для них рост (при этом задерживается рост посторонних микробов). Посев на плотные питат. среды в бактериол. чашках проводят путём растирания шпателем нескольких капель материала по поверхности среды. При исследовании паренхиматозных органов убитых или павших животных обжигают или фламбируют кусочек органа, затем надрезают его стерильными ножницами и с помощью пинцета проводят надрезанной поверхностью по питат. среде в чашке. В жидкую среду посев материала делают пастеровской пипеткой. Чтобы получить рост изолированных колоний микробов на плотной среде и отделить исследуемые бактерии от сопутствующих микроорганизмов, проводят дробный посев по методу Дригальского. Засеянные чашки и пробирки инкубируют в термостате при оптимальной для роста каждого вида бактерий темп-ре (чаще 37 °С) в течение 1-2 сут, в нек-рых случаях (туберкулёзные бактерии) - до 3-4 нед. Наиболее длительный и сложный этап Б. и.- родовая и видовая идентификация выделенных культур. Изучают только чистые культуры, полученные после пересева из одной колонии и имеющие идентичные морфологич. и тинкториальные свойства (см. Идентификация микробов ). Антигенные свойства культуры изучают в реакции агглютинации . Определение патогенных свойств бактерий проводят путём заражения лабораторных животных культурой или фильтратом культуры (при определении токсинообразования).

После изучения свойств бактерий сопоставляют полученные данные с признаками бактерий, имеющимися в классификационных схемах или определителях микробов (Д. Берджи, 1974; Н. А. Кра-силышков, 1949, и др.), и проводят их родовую и видовую дифференциацию. В сомнительных случаях проводят повторное исследование материала. Результаты Б. и. записывают в регистрационный журнал или на бланке лабораторной экспертизы, в заключении к-рой указывают, какой микроб выделен из исследуемого материала. Диагноз на инфекционную болезнь может быть поставлен только при учёте эпизоотологич., клинич. и патологоанатомич. данных.

Лит.: Лабораторные исследования в ветеринарии, под ред. В. Я. Антонова и П. Н. Блинова, М., 1971.


Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: "Советская Энциклопедия" . Главный редактор В.П. Шишков . 1981 .

Смотреть что такое "БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ" в других словарях:

    копрологическое исследование - лабораторное (макро и микроскопическое, химическое, бактериологическое) исследование кала с диагностической цельюБольшой медицинский словарь

    Изоля́ция инфекцио́нных больны́х - противоэпидемическое мероприятие, направленное на разобщение с окружающими людьми больных инфекционными болезнями, а также лиц, подозрительных на эти болезни или имевших контакт с больными, для предупреждения дальнейшего распространения инфекции … Медицинская энциклопедия

    БРЮШНОЙ ТИФ - – инфекционная болезнь из группы кишечных инфекций, характеризующаяся язвенным поражением лимфатического аппарата тонкой кишки, циклическим течением, бактериемией, симптомами интоксикации, сыпью на коже. Возбудитель – Salmonella typhi,… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

    Название болезни Возбудитель Источник возбудителя инфекции Пути передачи возбудителя инфекции Основные поражаемые группы животных Длительность инкубационного периода Носительство возбудителя Важнейшие клинические признаки Патологоанатомические… … Ветеринарный энциклопедический словарь - I Обследование больного Обследование больного комплекс исследований, направленных на выявление индивидуальных особенностей больного, установление диагноза болезни, обоснование рационального лечения, определение прогноза. Объем исследований при О … Медицинская энциклопедия

    ГОНОРЕЯ - ГОНОРЕЯ. Содержание: Исторические данные..............686 Биология гонококка в организме........6 87 Клинический иммунитет и реиифекция.....689 Лабораторный диагноз Г.............690 Г. как общее заболевание............695 Общая патология… … Большая медицинская энциклопедия

    Туберкулёз внелёгочный - Туберкулез внелегочный условное понятие, объединяющее формы туберкулеза любой локализации, кроме легких и других органов дыхания. В соответствии с клинической классификацией туберкулеза (Туберкулёз), принятой в нашей стране, к Т. в. относят… … Медицинская энциклопедия