Пункция костного мозга и другие проколы в лечебных и диагностических целях. Пункция и биопсия костного мозга: показания, проведение, анализ и результаты Последствия и анализ результатов
В гематологической клинике для полного представления о состоянии кроветворной системы используют анализ пункции костного мозга и трепанобиопсию.
Пункцию костного мозга проводят при помощи иглы из костей грудины по средней линии на уровне третьего-четвертого ребра, так как грудина имеет поверхность, которая наиболее удобна для пункции, а также содержит наибольшее количество клеток. Толщина костей грудины у детей меньше, поэтому последствия пункции костного мозга могут обернуться такой опасностью, как прокол грудины. Поэтому детям, особенно новорожденным и грудным, пункцию делают в пяточной кости или в верхней трети бедра. Можно пунктировать подвздошную кость, остистые отростки позвонков и ребра.
Попадая в очаг поражения, вызванным раком, миеломной болезнью, остеомиелитом и другими остеолитическими процессами, игла в кости плохо фиксируется и встречает меньшее сопротивление. При проведении процедуры иглу вводят в полость костного мозга, затем вытаскивают мандрен и очень плотно насаживают шприц. Оттягивая поршень шприца, всасывают до одного миллилитра костного мозга. Затем на часовое стекло переносят полученный материал, выбирают из него кусочки костного мозга, из которых готовят тонкие мазки. Правильное приготовление из ткани костного мозга мазка имеет большое практическое значение, так как какие-либо примеси могут не дать точных результатов. Делать мазков следует как можно больше, используя весь полученный материал. Костный мозг быстро свертывается, поэтому готовить мазки нужно быстро.
В мазках при апластических и гипопластических состояниях костного мозга количество клеток может быть небольшим или отсутствовать совсем. Это может быть результатом неправильного проведения пункции или следствием патологических процессов, поэтому проводят повторную процедуру.
При лейкозе, эритремии, остеомиелосклерозе, гипо- и апластических процессах особое значение приобретает гистологический метод исследования. Если пункция не дает возможности подтвердить наличие патологического процесса, то применяют трепанобиопсию подвздошной кости, а затем изучают полученный при этом гистологический материал. Для получения материала используют иглу-троакар.
Как у больных людей, имеющих гиперпластические процессы, так и у здоровых людей в трепанате (спонгиозной костной ткани) содержится большое количество костного мозга. У трепаната при наличии тяжелых апластических процессов цвет — желтый. Вызвано это тем, что костно-мозговые элементы при этом процессе почти полностью исчезают, а их заменяет жировая ткань. Кусочек извлеченной костной ткани при всех формах миелофиброза и остеомиелосклероза выглядит “сухим”. Из такой костной ткани очень тяжело извлечь необходимое для того, чтобы приготовить мазки, количество костного мозга.
Пункцией называют прокол органа. Осуществляется процедура в диагностических или лечебных целях.
Пункция костного мозга
Больным производится для его исследования, донорам - в целях получения здорового биологического материала. Проколу подвергаются такие кости, как подвздошная, эпифиз большеберцовой, пяточная, а также грудина. У взрослых в исследовании чаще всего задействованы гребни подвздошной кости и грудина. Пункция костного мозга может быть произведена даже в остистом отростке позвонка поясницы. Ввиду меньшей толщины и плотности грудины у детей, ее прокол в этом участке весьма опасен. В детском возрасте (в том числе самом раннем) пункция костного мозга преимущественно должна осуществляться в большеберцовой кости (ее верхней трети).
Процедура проводится с обезболиванием, в асептических условиях операционного помещения. Пункция костного мозга осуществляется в положении больного лежа на спине. При помощи полой иглы прокалывается грудина на уровне третьего ребра. Специальная игла для прокола оснащена диском-ограничителем в целях регулирования глубины пункции.
Под микроскопом осуществляется изучение окрашенного мазка взятого материала. Это позволяет выявить наличие и прочих изменений. При наличии в пунктате кровянистых примесей, кровь удаляют при помощи или отсасывают пипеткой. Такая необходимость связана с тем, то излишняя примесь в материале периферической крови не позволяет получить точное представления о составе костного мозга. В случае, если биологический материал получен слишком жидкий, применяют метод лейкоконцентрации. После отделения клеток от плазмы делают мазки из осадка.
Пункция (биопсия) костного мозга осуществляется в целях диагностического подтверждения метастазов, выяснения причин тромбоцитоза, лейкоцитоза, анемии. Эта процедура позволяет также оценить результативность применяемой лекарственной терапии при болезнях крови.
Достаточно редки в медицинской практике осложнения с диагностической пункцией. Как правило, связаны они могут быть с инфицированием в костномозговой полости. При проведении грудинного прокола отсутствует вероятность повреждения крупных сосудов. Только в случае грубого несоблюдения техники исследования возможны нарушения в целостности внутренних органов.
Спинномозговая пункция
Для извлечения с последующим или в целях вливания рентгеноконтрастных или лекарственных веществ применяется эта процедура.
В процессе процедуры игла вводится в Производиться пункция может на различных уровнях позвоночника. Чаще прокол осуществляется в поясничной области, в редких случаях в грудном отделе, в районе большого отверстия.
Дает весьма ценные диагностические данные. Ликвор, полученный в ходе процедуры, может содержать кровянистый или гнойные примеси. Это позволяет предполагать менингит или субарахноидальное кровоизлияние. Спинномозговая жидкость может быть и прозрачной. При помощи манометра (стеклянной трубки, изогнутой под углом, с имеющимися сантиметровыми делениями) определяется, под каким давлением вытекает ликвор из иглы: повышенном, нормальном или пониженном.
Пункция головного мозга при гематомах
Как показывает практика, сегодня, по сравнению с прошлыми годами, эта процедура имеет немного показаний. В частности, значительно снизилась необходимость в проколе в целях выявления внутримозговой гематомы (при отсутствии КТ). По мнению отдельных специалистов, не следует осуществлять пункцию в этих целях ввиду того, что процедура способствует усугублению повреждения, в то время как обычно гематомы не выявляются.
Пункция (от лат. punctio - укол) - прокол полой иглой полости тела, органа, кровеносного сосуда, ткани, опухоли, стенки очага воспаления. Эта процедура позволяет определить наличие или отсутствие в какой-либо полости жидкости, характерной для заболевания, выполняется для удаления жидкости, взятия ткани или введения в тело каких-либо веществ. Если необходимо взять образец костного мозга на исследование, то выполняют пункцию костного мозга.
Биопсия - это взятие образца ткани для исследования. Часто при выполнении пункции берут образец ткани для микроскопического исследования. Для доступа к костному мозгу делают прокол грудины. Клетки костного мозга по определенному методу окрашивают или подвергают специальной обработке. В лаборатории изменения клеток удается установить сравнительно быстро, что способствует быстрому диагностированию патологии.
Костный мозг находится в костномозговой полости. У новорожденного во всех костях содержится только красный костный мозг, где и происходит кроветворение. Позднее костный мозг заменяется жировой тканью, а красный костный мозг сохраняется в течение всей жизни в ребрах, грудине, костях черепа, таза, позвонках, в эпифизах трубчатых костей.
Как выполняется пункция?
Чаще костный мозг для анализа берут из грудины (стернальная пункция) или из гребней подвздошных костей. Реже делают прокол в одном из остистых отростков поясничных позвонков.
При выполнении пункции больной лежит на спине. При выполнении стернальной пункции делают прокол грудины полой иглой на уровне третьего ребра. Игла для проведения пункции снабжена фиксирующим диском, который предотвращает изменение выбранной глубины прокола. После прокола кожи и кости с помощью шприца делают забор пробы для анализа. Для обезболивания больному под кожу и под надкостницу вводят местный анестетик. После процедуры иглу вынимают, а на место прокола накладывают повязку. Пунктат наносят на специальное предметное стекло и делают микроскопический анализ мазков.
Забор образца костной ткани цилиндрической формы (чаще из гребней подвздошных костей), необходимого для биопсии, выполняется с помощью специального хирургического инструмента или кольцевого сверла.
Что можно диагностировать?
В костном мозге происходит кроветворение. Взятие его образца на анализ необходимо для подтверждения диагноза множества заболеваний крови, например, анемии , лейкоцитоза (увеличение числа лейкоцитов (белых кровяных телец) в единице объема крови, тромбоцитоза (увеличение числа тромбоцитов), а также для диагностики недостаточности функции костного мозга. Исследовав полученный материал, можно установить активность процесса кроветворения, состояние клеток крови и возможные изменения структуры клеток. Такую биопсию выполняют раковым больным при подозрении на метастазы в костный мозг . Чаще всего сюда метастазируют рак бронхов и предстательной железы.
Иногда биопсию костного мозга выполняют для определения эффективности лекарственного средства. Например, по анализу образца можно определить насколько эффективно применяемое лекарство, оказывает ли положительное воздействие ионизирующая терапия, не прогрессирует ли болезнь.
Опасна ли эта процедура?
Выполнение прокола и взятие пробы для анализа пациенты переносят сравнительно легко в связи с введением анестезирующих лекарств, поэтому такая пункция не опасна.
Анализ красного костного мозга применяют для диагностики заболеваний крови. Кровь, которая циркулирует в сосудистой системе, не достаточно информативна и порой не позволяет врачу поставить верный диагноз. Из этой статьи вы узнаете, что такое пункция костного мозга, для чего делают и как происходит выполнение этой процедуры.
Порой назначение этой процедуры пугает пациентов и вводит в состояние паники.
Чтобы этого не происходило, мы подробно расскажем в каких случаях делают пункцию костного мозга и для чего она нужна.
Анатомия и гистология
Костный мозг самый важный орган кровеносной системы. Этот орган ответственный за появление, созревание и дальнейшую дифференцировку клеток крови.
Кровь человека состоит из двух неравных частей плазмы и форменных элементов. Плазма это жидкая часть с растворенными в ней белками, минеральными веществами, витаминами и многим другим.
Форменные элементы это специализированные клетки, выполняющие каждая свою функцию:
- эритроциты — переносят кислород и углекислый газ от легких к тканям и обратно;
- лейкоциты — защитная функция от агрессивных факторов внешней среды и микроорганизмов;
- тромбоциты — остановка кровотечений при повреждении сосуда, создание тромба.
Эти клетки имеют срок жизни, через определенный промежуток времени они погибают, а на их смену появляются новые клетки.
Костный мозг представляет собой полужидкую губчатую ткань. Она содержится внутри костей, которые составляют основу скелета. Это единственная ткань во взрослом организме, которая в норме содержит большое количество незрелых, недифференцированных клеток или стволовых клеток, очень похожих на эмбриональные клетки плода.
Красный костный мозг содержится внутри плоских костей:
- грудина;
- подвздошные гребни тазовых костей;
- ребра;
- эпифизы трубчатых костей;
- тела позвонков.
Незрелые клетки красного костного мозга являются абсолютными чужаками для иммунокомпетентных зрелых клеток крови, поэтому они защищены особым барьером. В случае, когда лейкоциты и лимфоциты, циркулирующие в сосудах, контактируют с костным мозгом, то они уничтожают стволовые клетки, при этом развиваются аутоиммунные болезни. Аутоиммунные тромбоцитопении, лейкопении, или апластическая анемия.
Костный мозг состоит из основы — фиброзной ткани и специализированной ткани. В кроветворной ткани выделяют всего пять родоначальных ростков:
- Эритроцитарный — созревают эритроциты.
- Гранулоцитарный — эозинофилы, нейтрофилы, базофилы.
- Лимфоцитарный — лимфоциты.
- Моноцитарный — моноциты.
- Мегакариоцитарный — тромбоциты.
Процесс кроветворения очень сложный и чрезвычайно важный для жизнедеятельности организма. Стволовые клетки чувствительны к ионизирующему излучению, цитостатическим препаратам, и другим факторам.
Для чего делают пункцию
Врач может назначить такой вид исследования по нескольким причинам:
- Нарушенная лейкоцитарная формулы, как в сторону уменьшения, так и в сторону увеличения количества клеток. В эту категорию показаний входит неподдающаяся стандартной терапии анемия, отсутствие причины высокого уровня СОЭ.
- Подозрение заболевания кроветворных органов на фоне некоторых симптомов (лихорадка, снижение массы тела, увеличение лимфоузлов, похудание, сыпь, потливость, частые инфекционные заболевания, кровоизлияния в кожу и слизистые).
- Диагностика болезней накопления (это проявляется накоплением определенного вещества в тканях).
- Длительный подъем температуры (это может указывать на лимфому).
- Исследование для оценки трансплантата.
Какие виды пункции существуют
Из-за удобства расположения пункция костного мозга чаще всего делается в области грудины. Но есть и другие анатомические области и части тела, откуда делается забор материала:
- дужки и гребень подвздошной кости;
- остистые отростки позвонков поясничного отдела;
- пяточная кость — у детей до 2-х лет;
- большеберцовая кость — дети до 2-х лет;
В зависимости от возраста пациента, показаний для процедуры и состояния исследуемого человека, врач выбирает оптимальное место прокола. Трепанобиопсия это несколько иной вид исследования.
Вид игольной биопсии, в основе которой лежит взятие не только костного мозга, но и кусочков кости, для гистологического исследования. Из кости забирают участок компактного губчатого вещества вместе с костным мозгом. Это дает возможность добыть важные сведения не только о составе костного мозга, но и ультраструктурное клеточное строение костной ткани, а именно:
- состав клеток;
- соотношение кроветворной ткани и жировой клетчатки;
- состояние фиброзной основы и питающих сосудов.
В списке показаний для проведения именно трепанобиопсии стоит многие болезни и состояния.
- Цитопения не ясной этиологии — это пониженное количество всех форменных элементов в периферической крови. При стернальной пункции и заборе только костного мозга большая вероятность, что выяснить причину исходного состояния не удастся.
- Болезни не связанные напрямую с костным мозгом, но способные опосредованно на него повлиять. К таким патологиям относят хронические инфекции, эндокринные нарушения, болезни печени, почек, метастазы других опухолей.
- Диагностика гемабластозов — злокачественные заболевания крови.
- Апластическая анемия.
- Остеомиелофиброз.
- Верификация метастазов в костный мозг.
Трепан — устройство для трепанобиопсии похож на бипсийную иглу. Он состоит из полой иглы с мандреном и удобной ручки. Эта ручка соединяется с фрезой-торокаром. Место проведения это определенные части подвздошных костей слева или справа. Процедура требует обезболивания. Полученный материал погружают в фиксирующую жидкость.
Гистологическое исследование подразумевает под собой несколько этапов:
- фиксация;
- декальцинация;
- проведение через спирты;
- заливка в парафин;
- приготовление срезов;
- окраска эозином или азур-эозином.
Получившийся стеклопрепарат, исследуется под микроскопом врачом-гистологом.
Перед процедурой
Человеку, перед тем как пройти эту процедуру врач рассказывает о технике проведения и цели пункции костного мозга. Обязательным является сдача общего анализа крови. Благодаря этому простому анализу медики смогут определить состояние периферической крови и способность организма к заживлению раны. Если анализ покажет низкую свертываемость, пациент может серьезно пострадать во время процедуры.
Собирается подробный анамнез о болезнях, которые сопровождают этого человека в течение жизни. Больше всего интересует наличие аллергических реакций на лекарства, и какие препараты принимаются сейчас.
Так же важны сведения о наличии генерализованный заболеваний костной ткани. Если пациенту ранее проводились, какие либо операции на грудине, он обязательно должен об этом сообщить. В случае приема назначенных врачом препаратов разжижающего кровь, то на несколько дней до проведения пункции и после нее, человек должен отказаться от их приема. При необходимости делается проба на наличие аллергической реакции на тот анестетик, который будет применен.
Утром накануне выполнения процедуры пациенту следует принять гигиенический душ. Мужчины сбривают волосы на верхней части грудной клетки. Последний прием пищи не позднее 3 часов до исследования. Так как манипуляция достаточно опасна, в этот день не следует назначать другие инвазивные методы исследования.
Как выполняется пункция
Проведение отбора костного мозга проводят в условиях стационара. Больному рекомендуется принять легкий завтрак накануне и опорожнить мочевой пузырь и кишечник. Чаще всего пункцию делают из грудины. Это кость на груди в виде пластины, соединяющей ребра. В промежутке между вторым и третьим ребром костная пластина наиболее тонкая. Лежа на спине, пациенту обрабатывают антисептиком кожу на груди.
Затем место, все слои в месте прокола обезболивают с помощью новокаина вплоть до надкостницы грудины. Некоторые специалисты считают, что новокаин может испортить полученный биоптат. Из-за контакта костного мозга с новокаином клетки могут подвергнуться деформации и разрушению.
Ввиду того, что болевой порог у каждого человека разный то стерпеть болевые ощущения, которые возникнут, некоторые люди не смогут.
Процедура забора необходимого материала по методу Аринкина производят при помощи иглы Кассирского, которая имеет специальный ограничитель, не позволяющий сделать слишком глубокий прокол. После прохождения кожи жировой клетчатки и кости вынимают мандрен и присоединяют шприц. Набирают в шприц содержимое грудины вместе с попутной кровью. Количество для исследования не более 1 мл. Иглу извлекают, дефект кожи защищают стерильной повязкой.
Как исследуют полученный биоптат
Виды исследований из полученного красного костного мозга:
- мазок для миелограммы;
- цитологическое исследование;
- иммунофенотипизирующее исследование;
- цитогенетическое исследование.
Полученный материал для миелограммы не хранят и незамедлительно готовят из него мазок. Красный костный мозг сворачивается намного быстрей, чем обычная кровь. На предметное стекло под острым углом выливают содержимое шприца, другим стеклом растягивают кровь. Готовят не менее 10 мазков.
Результат может быть готов уже через 4 часа. Другие виды исследования дадут ответ в разные сроки, но не позже чем через месяц. Окончательный вывод по анализу может сделать только лечащий врач.
Уход за местом забора костного мозга
После проведения забора материала накладывают стерильную повязку. Если процедура делалась амбулаторно, то через пару часов, исследуемый может отправляться домой. Возможно, появление боли или чувства дискомфорта в ране. Если ощущения слишком сильные, то врач прописывает обезболивающие. Повязка должна быть сухой в течение суток, иначе возможны осложнения.
Нельзя мыться в душе или принимать ванну. В случае, когда повязка продолжает пропитываться кровью или болевой симптом становиться более интенсивным, необходимо срочно посетить врача. Поводом для обращения так же служит повышение температуры, покраснение и припухлость.
Осложнения пункции костного мозга
Осложнения после выполнения процедуры не специфичны. Правильно выполненная манипуляция, с соблюдением правил, которые позволяют избежать попадания инфекции в рану, исключают возможность осложнений:
- Прокол грудины насквозь в случае стернальной пункции — это возможно у детей, и если у пациента остеопороз.
- Кровотечение — промокание повязки может свидетельствовать о повышенной кровоточивости тканей.
- Инфицирование — попадание в послеоперационную рану инфекции возможна в ряде нарушений, как со стороны пациента в ранний послеоперационный период, так и со стороны врача.
- Аллергическая реакция на обезболивание — если у пациента были случаи аллергического ответа на введения новокаина, необходимо обязательно сообщить врачу.
Противопоказания
Противопоказания делятся на относительные это когда после устранения тех или иных состояний пункцию можно делать:
- инфаркт миокарда;
- тяжелая форма хронической сердечной патологии и сердечной недостаточности;
- декомпенсация сахарного диабета;
- гнойные и воспалительные заболевания кожи в области места забора;
Противопоказания
Абсолютные противопоказание это состояния, при котором выполнение пункции усугубит общее здоровье пациента: тяжелое течение геморрагического диатеза – это заболевание сопровождается повышенной кровоточивостью тканей.
Заключение
Проведение пункции красного костного мозга является высокоинформативной диагностической манипуляцией, достаточно простой в исполнении. Риск возникновения осложнений у испытуемого минимальный, болезненность не значительна.
Точно и своевременно установленный диагноз дает хороший шанс для пациента на выздоровление. После проведения соответствующего лечения состояние костного мозга позволяет оценить его эффективность.
Костный мозг получают пункцией губчатых костей по методу Аринкина с помощью иглы Кассирского, имеющей щиток-ограничитель, который можно установить на необходимую глубину в зависимости от толщины кожи и подкожной клетчатки. Игла должна быть сухой и обезжиренной. Костный мозг насасывают шприцем емкостью 10 - 20 мл (для обеспечения нужного вакуума предварительно проверяют, не пропускает ли шприц воздух).
Пунктируют чаще всего грудину в области рукоятки или верхней трети ее тела (на уровне 3 - 4 ребра) по средней линии. Во время пункции грудины больной лежит на спине.
У детей существует опасность прокола грудины ввиду ее меньшей плотности и индивидуальных различий в толщине кости. Поэтому у детей, особенно у новорожденных и грудных, предпочтительно делать пункцию в верхней трети большеберцовой кости (с внутренней стороны дистального эпифиза бедренной кости) или пяточной кости. Для стернальной пункции у детей В. Г. Михайловым разработана специальная игла.
Иногда пунктируют подвздошную кость (на 1 - 2 см кзади от передней верхней ости ее гребешка), ребра и остистые отростки позвонков.
Техника пункции.
Место пункции дезинфицируют спиртом и йодной настойкой. Пункцию проводят либо без обезболивания, либо при помощи тонкой иглы инфильтрируют кожу, подкожную клетчатку и надкостницу 1 - 2% раствором новокаина в количестве 2 мл. Нужно отметить, что полученный с помощью обезболивания материал очень часто бывает трудно, а иногда даже невозможно, исследовать морфологически, поскольку клетки в этом случае очень часто деформируются или лизируются. Кроме этого, изменяется окраска препаратов. Возможно, это связано с попаданием небольших количеств новокаина в иглу при проведении пункции после обезболивания.
Перед тем как сделать укол, предохранитель-ограничитель при помощи винтовой нарезки устанавливают на необходимую глубину прокола и вставляют мандрен. Илу направляют перпендикулярно к грудине по ее средней линии, быстрым движением прокалывают кожу и подкожно жировой слой и проходят наружную пластинку грудины. В этот момент уменьшается сопротивление и игла, как бы проваливаясь, входит в полость костного мозга. При этом она устанавливается вертикально и неподвижно. Если игла не находится в неподвижном состоянии, то, не вынимая ее, отодвигают предохранитель несколько выше и вновь продвигают иглу в полость костного мозга. Следует помнить, что при наличии рака, миеломной болезни, остеомиелита и других остеолитических процессов игла, попадая в очаг поражения, встречает меньшее сопротивление и плохо фиксируется в кости.
После того как игла войдет в полость костного мозга, вынимают мандрен и плотно насаживают шприц. Далее оттягивают поршень шприца и насасывают не более 0,5 - 1 мл костного мозга (при большем количестве пунктата в нем может содержаться больше периферической крови). Если не удается получить костный мозг, то, не вынимая иглы, переводят ее в другое положение - выше, ниже или в стороны. Затем снова с помощью шприца насасывают немного пунктата. После взятия костного мозга иглу, не разъединяя со шприцем, извлекают из грудины, а место прокола закрывают стерильной наклейкой. Полученный материал переносят на часовое стекло и быстро готовят из него тонкие мазки, так как свертывание костного мозга наступает быстрее, чем периферической крови.
Для замедления свертывания костного мозга В. И. Каро рекомендует следующий простой прием: на часовое стекло, покрытое парафином, перед пункцией насыпают очень тонким слоем (припудривают) порошкообразный цитрат натрия. Полученный при пункции костный мозг сразу же помещают на часовое стекло поверх цитрата натрия, который, растворяясь в жидкой части пунктата, тормозит его свертывание. Мельчайшие кристаллики цитрата натрия не мешают приготовлению мазков, не деформируют клеток.
Если пунктат содержит примесь крови, то последнюю удаляют с помощью фильтровальной бумаги или отсасывают пастеровской пипеткой, поскольку большая примесь периферической крови не дает точного представления о клеточном составе костного мозга. Если же получено большое количество жидкого костного мозга, то методом лейкоконцентрации отделяют клетки от плазмы и уже из осадка делают мазки.
Очень большое практическое значение имеет правильное приготовление мазка из ткани костного мозга. В хорошо приготовленном препарате клетки расположены густо, но отдельно, и их структура хорошо видна. При гипопластических и апластических состояниях костного мозга мазки содержат небольшое количество клеток, а иногда они полностью отсутствуют. Вопрос о том, является ли это следствием патологических процессов или результатом неправильно проведенной пункции, можно решить при повторно проведенной пункции. Рекомендуется делать как можно больше мазков, использовав для этого весь полученный материал.
Если кроме морфологического исследования костного мозга необходимо и количественное его исследование (подсчет количества миелокариоцитов и мегакариоцитов), то сначала делают соответствующие разведения костного мозга, а затем делают мазки.
Литература:
- Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. Москва "Медицина" 1975 г.
- Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под ред. проф. В. В. Меньшикова Москва "Медицина" 1987 г.
