Главная > Окситоцин > Гуморальный и клеточный иммунитет. Кожные аллергические пробы. А. Исследование гуморального иммунитета


Гуморальный и клеточный иммунитет. Кожные аллергические пробы. А. Исследование гуморального иммунитета




Гуморальное звено иммунитета

Иммуноглобулин М (IgM)

Иммуноглобулины М - белки глобулиновой природы, молекуляр­ной массой 900 кДА, синтезируе­мые В-лимфоцитами преимущественно при первичном контакте с антигеном.IgM обра­зуется на ранних ста­диях инфекционного процесса (через 3-6 дней по­сле взаимодействия с антигеном) и осуществляет основную защиту организма при бактерие­мии. Через сосудистую стенку IgM не прони­кает.

Методы исследования : радиальная иммунодиффузия по Манчини, нефелометрия. Определение IgM проводят при: хронических, тяжело протекающих инфекциях; после спленэктомии; длительном примене­нии гормонов, иммунодепрессантов; миеломной болезни, внутриут­робных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях. Норма (г/л): кровь из пуповины - < 0,25; дети до 1 мес. - 0,2-0,8; 2-5 мес. - 0,25-1,00; 6-9 мес. - 0,35-1,25; 10 мес. - 1 год - 0,4-1,5; 1-8 лет - 0,45-2,00; старше 8 лет - 0,5-2,5.

Снижение IgM наблюдают при:первичных иммунодефицитах (болезнь Брутона, общая вариабельная иммунная недостаточность),гастроэнтеропатиях с потерей белка, ожоговой болезни, множествен­ной миеломе IgG или IgA-типа, спленэктомии, приеме гормонов, цито­статиков.

Иммуноглобулин G (IgG)

Иммуноглобулины класса G - белки глобулиновой природы моле­кулярной массой 150 кДА, синте­зируемые В-лимфоцитами в ответ на антигенный стимул. При первич­ном инфицировании появляются через 8-14 дней и осуществляют за­щиту организма от возбудителей и их ток­синов.IgG проникает через сосудистую стенку и плаценту.

Определение IgG проводят при: хронических, рецидивирующих, тяжелых, атипично протекающих инфекциях; спленэктомии; лечении гормонами, цитостатиками; для диагностики иммунодефицита по гу­моральному звену иммунитета; аутоиммунных заболеваниях; хрони­ческих болезнях печени.

Норма (г/л): кровь и пуповины - 6,5-14,0; дети до 1 мес. - 2,5-9,0; 2-5 мес. - 2,0-7,0; 6-11 мес. - 2,2-9,0; 1-3 года - 2,9-12,0; 4-6 лет - 4,6-12,4; старше 6 лет - 6,5-16,0.

Клиническое значение. Повышение уровня IgG бывает при: подо­стрых, хронических и рецидивирующих инфекциях (инфекционный мононуклеоз, стафилококковая инфекция, туберкулез, инфекционный эндокардит), аутоиммунных заболеваниях (ревматоидный артрит, СКВ, болезнь Шегрена), саркоидозе, болезнях печени (гепатиты, цир­розы), злокачественных новообразованиях, множественной миеломе IgG-типа, доброкачественной парапротеинемии. Нарастание уровня IgG наблюдается при внутриутробных инфекциях.

Уровень IgG снижается при: первичных и вторичных иммуноде­фицитах, гастроэнтеропатиях с потерей белка, ожоговой болезни, неф­ротическом синдроме, множественной миеломе IgA или IgM-типа, лечении гомонами, цитостатиками.

Иммуноглобулин А (IgA)

Иммуноглобулины А - белки сыворотки крови и секретов слизи­стых оболочек с молекулярной массой 160 кДА, синтезируе­мые В-лимфоцитами в ответ на антигенное воздействие. IgA появля­ется через 15-21 день после контакта с антигеном. IgA преобладает в выделениях (слюна, слезная жидкость, носовой секрет, пот, бронхи­альный секрет) и обеспечивает защиту от возбудителей, пыльцевых и пищевых аллерге­нов.

Определение IgA показано при: хронических и рецидивирующих инфекциях (особенно нижних дыхательных путей, ЖКТ), анафилакти­ческих и посттрансфузионных реакциях, множественной миеломе. Норма (г/л): кровь из пуповины - 0,01-0,04; дети до 1 мес. - 0,02-0,5; 2-5 мес. - 0,1-0,8; 6-11 мес. - 0,18-0,9; 1-3 года - 0,35-1,15; 4-5 лет - 0,55-1,6; 6-8 лет - 0,65-2,0; 9-12 лет - 0,7-2,5; старше 12 лет - 0,8-3,8.

Клиническое значение. Уровень IgA повышается при: хрониче­ских инфекциях органов пищеварения и дыхательных путей, опухолях нижних отделов ЖКТ, хронических заболеваниях печени, аутоиммун­ных заболеваниях (на ранней стадии), множественной миеломе IgA-типа.

Уровень IgA снижается при: врожденных дефицитах гумораль­ного звена иммунитета (болезнь Брутона, вариабельная иммунная не­достаточность, селективный дефицит IgA), хронических и рецидиви­рующих заболеваниях респираторного тракта, поллинозах, гастроэн­теропатиях с потерей белка, ожоговой болезни, нефротическом син­дроме, множественной миеломе IgG и IgM-типа.

Иммуноглобулин Е (IgE) общий

Иммуноглобулины класса Е (реагины) - белки сыворотки крови и секретов слизистых оболочек, являющиеся гликопротеидами с моле­кулярной массой 200 кДА. Синтезируются В-лимфоцитами в ответ на антигены внешней среды (домашняя пыль, пыльца растений, инфекци­онные агенты, пищевые продукты и т.д.) и вызывают аллергические реакции немедленного типа. IgE участвует в защите слизистых оболо­чек дыхательных путей и ЖКТ благодаря индукции острого воспале­ния, осуществляет антигельминтную защиту.

Норма : до 100 ЕД/мл.

Клиническое значение. Уровень IgE общего повышается при: па­разитарных инфекциях, бронхолегочном аспергиллезе, бронхиальной астме, поллинозе, атопическом дерматите, крапивнице, некоторых ви­дах пищевой и лекарственной аллергии.

Уровень IgE общего значительно повышен при миеломе IgE-типа, ряде первичных иммунодефицитов (болезнь Джоба, синдром Вис­котта-Олдрича, хронический гранулематоз, селективный дефицит IgА).

Уровень IgE общего снижается при: некоторых прогрессирующих опухолях, миеломе не IgE-типа, первичных иммунодефицитах (атаксия-телеангиоэктазия, болезнь Брутона).

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)

ЦИК - эта продукт взаимодействия антигена и соответствующего антитела. Образование ЦИК - естественный процесс, направленный на нейтрализацию и удаление антигенов. Определение ЦИК используют для прогнозирования и мониторинга активности тяжелых инфекций, аутоиммунных заболеваний, злокачественных новообразований, син­дрома эндогенной интоксикации.

Методы исследования : осаждение полиэтеленглюколем (ПЭГ 6000) - метод недостаточно чувствителен. Норма : 0-60 ЕД; ЦИК крупнодис­персные - k<1,2; ЦИК среднедисперсные -1,21,5.



Клиническое значение. Увеличение уровня ЦИК возможно при: ви­русных, бактериальных, протозойных инфекциях; болезнях печени (гепатиты, циррозы); аутоиммунных заболеваниях (ревматоидный арт­рит, СКВ, аутоиммунный гепатит, аутоиммунная гемолитическая ане­мия); злокачественных новообразованиях; нефритах различной этио­логии; сывороточной болезни.

Крупно- и мелкодисперсные ЦИК легко удаляются из кровотока и редко вызывают повреждение тканей. Среднедисперсные ЦИК наибо­лее биологически активны, плохо удаляются из кровотока, вызывают воспалительные изменений тканей.

При трактовке результатов иммунологического исследования необходимо помнить о том, что:

1. полноценный анализ иммунограммы можно проводить лишь с учетом клинической картины заболевания. Нормальные показа­тели иммунологического обследования у больных с клиниче­скими признаками иммунной недостаточности не исключают иммунодефицитное состояние (ИДС);

2. значимость иммунологического исследования резко возрастает при комплексном анализе показателей иммунограммы. Осо­бенно важно исследование показателей в динамике;

3. динамическое исследование иммунологических показателей при ряде заболеваний позволяет оценить особенности течения про­цесса, его активность, тяжесть и прогноз;

4. вторичные ИДС - это не самостоятельные заболевания, а состоя­ния, способствующие:повышенной восприимчивости к инфек­ции, склонно­сти к хронизации патологических состояний, фор­мированию аллерги­ческих и аутоиммунных заболеваний, появ­лению онкопатологии.

Фундамент иммунологии был заложен изобретением микроскопа, благодаря чему удалось обнаружить первую группу микроорганизмов - болезнетворные бактерии.

В конце XVIII века английский сельский врач Эдвард Дженнер сообщил о первой удачной попытке предотвратить заболевание посредством иммунизации. Его подход вырос из наблюдений за одним интересным явлением: доярки часто заражались коровьей оспой и впоследствии не болели натуральной оспой. Дженнер ввел маленькому мальчику гной, взятый из пустулы (нарыва) коровьей оспы и убедился в том, что мальчик оказался иммунным к натуральной оспе.

Работа Дженнера дала начало изучению теории микробного происхождения заболеваний в XIX веке Пастером во Франции и Кохом в Германии. Они отыскали антибактериальные факторы в крови животных, иммунизированных микробными клетками.

Луи Пастер успешно выращивал различные микробы в лабораторных условиях. Как часто бывает в науке, открытие было сделано случайно при культивировании возбудителей холеры кур. Во время работы одна из чашек с микробами была забыта на лабораторном столе. Было лето. Микробы в чашке несколько раз нагревались под солнечными лучами, высохли и потеряли способность вызывать заболевание. Однако куры, получившие эти неполноценные клетки, оказались защищенными против свежей культуры холерных бактерий. Ослабленные бактерии не только не вызывали заболевание, а, напротив, давали иммунитет.

В 1881 году Луи Пастер разработал принципы создания вакцин из ослабленных микроорганизмов с целью предупреждения развития инфекционных заболеваний.

В 1908 г. Илья Ильич Мечников и Пауль Эрлих были удостоены Нобелевской премии за работы по теории иммунитета.

И. Мечников создал клеточную (фагоцитарную) теорию иммунитета, согласно которой решающая роль в антибактериальном иммунитете принадлежит фагоцитозу.

Сначала И. И. Мечников как зоолог экспериментально изучал морских беспозвоночных фауны Черного моря в Одессе и обратил внимание на то, что определенные клетки (целомоциты) этих животных поглощают все инородные частицы (в т. ч. бактерии), проникающие во внутреннюю среду. Затем он увидел аналогию между этим явлением и поглощением белыми клетками крови позвоночных животных микробных телец. И. И. Мечников осознал, что это явление не питание данной единичной клетки, а защитный процесс в интересах целого организма. Ученый назвал действующие таким образом защитные клетки фагоцитами - "пожирающими клетками". И. И. Мечников первым рассматривал воспаление как защитное, а не разрушительное явление.

Против теории И. И. Мечникова в начале XX века выступали большинство патологов, так как они считали лейкоциты (гной) болезнетворными клетками, а фагоциты - разносчиками инфекции по организму. Однако, работы Мечникова поддержал Луи Пастер. Он пригласил И. Мечникова работать в свой институт в Париже.

Пауль Эрлих открыл антитела и создал гуморальную теорию иммунитета , установив, что антитела передаются ребенку с грудным молоком, создавая пассивный иммунитет . Эрлих разработал метод изготовления дифтерийного антитоксина, благодаря чему были спасены миллионы детских жизней.

Теория иммунитета Эрлиха говрит о том, что на поверхности клеток есть специальные рецепторы, распознающие чужеродные вещества (антигенспецифические рецепторы ). Сталкиваясь с чужеродными частицами (антигенами) эти рецепторы отсоединяются от клеток и в качестве свободных молекул выходят в кровь. В своей статье П. Эрлих назвал противомикробные вещества крови термином "антитело ", так как бактерий в то время называли "микроско­пические тельца".

П. Эрлиха предполагал, что еще до контакта с конкретным микробом в организме уже есть антитела в виде, который он назвал "боковыми цепями". Теперь известно, что он имел в виду рецепторы лимфоцитов для антигенов.

В 1908 году Паулю Эрлиху вручили Нобелевскую премию за гуморальную теорию иммунитета.

Чуть раньше Карл Ландштейнер впервые доказал наличие иммунологических различий индивидуумов в пределах одного вида.

Питер Медовар доказал удивительную точность распознавания иммунными клетками чужеродных белков: они способны отличить чужеродную клетку всего по одному измененному нуклеотиду.

Френк Бёрнет постулировал положение (аксиома Бёрнета), что центральным биологическим механизмом иммунитета является распознавание своего и чужого.

В 1960 году Нобелевскую премию по физиологии и медицине получили Питер Медавар и Френк Бёрнет за открытие иммунологической толерантности (лат. tolerantia - терпение) - распознавание и специфическая терпимость к некоторым антигенам.

Количественное содержание иммуноглобулинов (IgА, IgМ, IgG) является основным показателем гуморального иммунного ответа и необходимо для оценки функциональной полноценности иммунной системы и диагностики патологических нарушений ее работы.

Определение уровня иммуноглобулинов является важным при диагностическом и клиническом мониторинге первичных иммунодефицитов, моноклональных гаммапатий, аутоиммунных заболеваний и других патологических состояний (Х-сцепленной агаммаглобулинемии, гипер-IgM, селективном IgА-дефиците, дефиците субклассов IgG, транзиторной гипогаммаглобулинемии новорожденных и др.). При первичных иммунодефицитах определение иммуноглобулинов имеет решающее диагностическое значение.

Снижение концентрации может свидетельствовать о различных патологиях – от генетических дефектов синтеза иммуноглобулинов до транзиторных состояний, связанных с потерей белка организмом . Причинами снижение синтеза иммуноглобулинов могут быть:

  • моноклональные гаммапатии,
  • термические ожоги,
  • злокачественные лимфомы,
  • плазмоцитомы,
  • болезни Ходжкина,
  • заболевания почек,
  • первичные и вторичные иммунодефициты.

При первичном контакте с антигеном сначала синтезируются IgM, затем IgG. При повторном – IgG синтезируются быстрее и в большем количестве. IgА нейтрализует вирусы и бактериальные токсины. Повышение концентраций говорит о наличии аллергических, аутоиммунных процессов, характерно для инфекционных заболеваний . Увеличение Ig разных классов отмечают при различных патологических ситуациях. Концентрация IgM возрастает в острый период и при обострении хронической инфекции, IgG – в стадии разрешения или формирования хронической инфекции, IgА – при некоторых вирусных инфекциях.

Метод исследования : ИФА, иммунотурбидиметрия, иммунонефелометрия.

Условия взятия и хранения образца : Сыворотка крови. Хранение не более 24 ч при 4–8 °С. Допускается однократное замораживание образца.

Система комплемента – комплекс белков, постоянно присутствующих в крови. Это каскадная система протеолитических ферментов, способных лизировать клетки, предназначенная для гуморальной защиты организма от действия чужеродных агентов, участвует в реализации иммунного ответа организма. Является важным компонентом как врожденного, так и приобретенного иммунитета. Она активизируется реакцией антиген-антитело и необходима для опосредованного антителами иммунного гемолиза и бактериолиза, играет важную роль при фагоцитозе, опсонизации, хемотаксисе и иммунном гемолизе и необходима для усиления эффекта взаимодействия между специфическими антителами и антигеном.

Одной из причин снижения факторов комплемента в сыворотке крови могут являться аутоантитела, направленные против факторов комплемента. Снижение С3 и С4 компонентов комплемента сопровождается клинической картиной рецидивирующего кожного геморрагического васкулита и артралгией.

Уровень компонентов комплемента в крови варьирует в широких пределах. Наследственный дефицит компонентов комплемента или их ингибиторов может приводить к аутоиммунным нарушениям, повторным бактериальным инфекциям, хроническим воспалительным состояниям.

С3-компонент комплемента – центральный компонент системы, белок острой фазы воспаления. Это важнейшая часть защитной системы против инфекций. Он образуется в печени, макрофагах, фибробластах, лимфоидной ткани и коже. Вследствие активации С3 выделяется гистамин из тучных клеток и тромбоцитов, хемотаксис лейкоцитов и соединение антител с антигеном, поддерживается фагоцитоз, усиливается проницаемость стенок сосудов и сокращение гладкой мускулатуры. Активация С3 играет важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний.

С4-компонент комплемента – гликопротеин, синтезируется в легких и в костной ткани. С4 поддерживает фагоцитоз, увеличивает проницаемость стенки сосудов, участвует в нейтрализации вирусов. Он участвует только в классическом пути активации системы комплемента. Увеличение или уменьшение содержания комплемента в организме наблюдается при многих заболеваниях.

Показания к исследованию:

  • подозрение на врожденный дефицит комплемента, аутоиммунные заболевания, острые и хронические бактериальные и вирусные инфекции, (особенно рецидивирующие), онкологические заболевания;
  • динамическое наблюдение больных с системными аутоиммунными заболеваниями.

Снижение концентрации С3 -наблюдается при врожденных дефектах комплемента, различных воспалительных и инфекционных, аутоиммунных заболеваниях, длительном голодании, при лечении цитостатиками, ионизирующем излучении.

Повышение концентрации С4 характерно для реакции острой фазы, отмечается при аутоиммунных заболеваниях, назначении некоторых лекарственных препаратов.

Снижение концентрации С4 – отмечается при врожденных дефектах системы комплемента (С4 дефицит новорожденных), некоторых аутоиммунных заболеваниях, системных васкулитах, синдроме Шегрена, трансплантации почек.

Циркулирующие иммунные комплексы в крови (ЦИК) – показатель развития различных воспалительных процессов в организме и активности их течения. Повышение ЦИК наблюдается при острых и хронических инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, вирусных гепатитах. ЦИК присутствуют у многих людей, страдающих СКВ и РА, особенно в тех случаях, когда есть осложнения в виде васкулитов. Существует положительная корреляция между активностью заболевания и уровнем ЦИК в крови. Формирование ЦИК представляет собой физиологический механизм защиты, приводящий к быстрому устранению либо эндогенных, либо экзогенных антигенов через ретикуло-эндотелиальную систему. Однако ЦИК обладают способностью связывать и активировать комплемент, что ведет к повреждению ткани. Выходя из кровотока в мелких сосудах, они могут откладываться в тканях, в гломерулах почек, в легких, коже, суставах, стенках сосудов. Клинически это часто проявляется гломерулонефритами, артритами, нейтропениями. Высокий уровень ЦИК в сыворотке крови и/или в других биологических жидкостях наблюдается при многих воспалительных и злокачественных заболеваниях, что может стать причиной развития патологии .

Определение ЦИК в сыворотке крови – важный маркер для оценки активности заболевания, особенно при аутоиммунных заболеваниях. Снижение концентрации ЦИК в течение заболевания или при лечении свидетельствует об угасании воспалительного процесса и эффективности терапии.

1. Методы первого уровня основаны на доказательстве взаимодействия в системе антиген-антитело. Положительные результаты свидетельствуют о специфичности реакций. В принципе можно выделить три типа реакций:

Тест конъюгации. При этом маркируют один из реагентов, результаты оценивают по его связыванию с другими реагентами на основании физических или химических свойств конъюгата (прямая иммунофлюоресценция, иммунопероксидазный метод, ауторадиография);

Тесты, основанные на изменении свойств одного из реагентов (например, изменение флюоресценции, электрического потенциала, вязкости раствора; синтез соединений с более высокой молекулярной массой, изменение ферментативной активности антигенов). Эти тесты обладают ограниченными возможностями;

Тесты, основанные на отделении комплекса антиген-антитело от несвязанных реагентов с помощью техники высаливания, преципитации, использования специфических антител или адгезии на клеточной поверхности. К ним следует отнести большинство радио- и иммуноферментных методов.

2. Методы второго уровня основаны на более сложном характере взаимодействия между антигеном (поливалентным) антителом (по меньшей мере двухвалентными антителами). При этом механизмы преципитации, агглютинации и т. д., лежащие в основе комплекса, в большей степени, чем при методах первого уровня, зависят от рН, ионной силы и других условий реакции. Поэтому положительные результаты не всегда определяют степень выраженности реакции антиген-антитело, а отрицательные еще не означают отсутствия этой реакции. Тем не менее, среди методов этой группы можно отметить и такие иммунологические тесты, которые имеют особое значение для клинической практики.

К методам второго уровня относятся следующие реакции: преципитация, агглютинация, реакция связывания комплемента. Промежуточное положение между методами первого и второго уровней занимают исследования на изолированных клетках, например цитолиз или феномен освобождения медиаторов с участием эозинофилов.

Реакции, основанные на феномене агглютинации . В отличие от реакции преципитации при агглютинации антиген представлен в корпускулярной форме (прямая агглютинация эритроцитов или бактерий) либо связан на частицах носителя (непрямой вариант, пассивная агглютинация). Механизм агглютинации изучен еще не полностью. Согласно одной из теорий, главная роль принадлежит специфической адсорбции антител на поверхности клеток, что приводит к снижению поверхностного потенциала или повышению гидрофобных свойств мембраны. В пользу этой теории свидетельствует тот факт, что агглютинация, как и преципитация, в значительной мере зависит от присутствия микроколичеств электролитов. Согласно другой концепции, а это соответствует теории «решетки» Marrack, агглютинация происходит при условии, если один активный центр двухвалентного антитела соединяется с одной антигенной детерминантой, а второй активный центр - с другой детерминантой. Избыток или недостаток антител приводит к торможению агглютинации. Хотя такие свойства, как размеры частиц и структура Ig, вносят коррективы в интерпретацию данных, тем не менее важные аргументы свидетельствуют в пользу этой теории.

Подобно преципитации данный метод используют как полуколичественный анализ, с помощью которого определяют то максимальное разведение сыворотки, при котором еще возможна агглютинация. Результаты можно оценивать макроскопически. Чувствительность агглютинации значительно варьирует при использовании разных систем антиген-антитело. Кроме того, агглютинация - это более чувствительный метод, чем реакция преципитации (почти в 103 раз). При оптимальных условиях удалось выявить антитела с минимальной концентрацией да 0,05 мл. Ig известных классов обладают разными агглютинационными свойствами. Так, способность к агглютинации молекул IgM в 60-180 раз выше, чем молекул IgG.

Прямая реакция агглютинации происходит при условии, если антиген является элементом клеточной мембраны или присутствует на поверхности других частиц (эритроцитов, бактерий, частиц пыльцы). Постановка этой реакции осуществляется как в пробирках (тогда результаты оценивают после седиментации), так и в лунках, расположенных на специальной пластине. В частности, определение группы крови человека - это общепринятый экспресс-метод, также основанный на феномене агглютинации. Для идентификации группы крови каплю суспензии эритроцитов смешивают с каплей стандартной агглютинирующей сыворотки определенной специфичности: при положительной реакции агглютинаты видны уже макроскопически, если реакция отсутствует, то суспензия эритроцитов сохраняет гомогенность.

Антиглобулиновый тест (реакция Кумбса). Антиглобулиновый тест служит для доказательства присутствия в сыворотке неагглютинирующих или «неполных» антител. Наиболее часто этот метод используют при диагностике болезней крови, обусловленных иммунным гемолизом. Первоначально исследователи применяли антиглобулиновую сыворотку (против глобулина человека), однако позднее было установлено, что она реагирует с компонентами комплемента. В настоящее время вместо нее интенсивно внедряют моноспецифические антисыворотки против определенных классов Ig (моноклональные антитела). Прямой вариант теста служит для обнаружения связанных с клеткой «неполных» антител; при непрямом варианте выявляют циркулирующие антитела: исследуемую сыворотку предварительно инкубируют с эритроцитами, а затем воспроизводят прямой тест. Разработана постановка антиглобулинового теста в комбинации с пассивной гемагглютинацией для выявления как неагглютинирующих аутоантител, так и реагинов. И, наконец, непрямая техника флюоресценции - это также одна из модификаций антиглобулинового теста.

Тест потребления антиглобулина (тест Штеффена). Следует обратить внимание на этот метод, хотя в данном случае мы имеем дело лишь с индикаторной реакцией. С помощью этого теста можно выявить антитела к антигенам клеток тканей, клеточных ядер или нерастворимых элементов тканей. Определить эти антитела с помощью реакции агглютинации невозможно. При непрямом варианте теста антигены (гомогенизированные ткани) инкубируют с исследуемой сывороткой, а затем тщательно отмывают для удаления несвязанных антител. Далее с этим гомогенатом инкубируют антиглобулиновую сыворотку с заранее известным титром. В результате происходит потребление антиглобулина антителами, адсорбированными на тканях. В соответствии с этим титр антиглобулиновой сыворотки снижается. Уровень исследуемых антител до и после инкубации определяют с помощью индикаторной системы, состоящей из сенсибилизированных неполными антителами эритроцитов, поэтому данный вариант можно рассматривать как модификацию реакции торможения гемагглютинации. При постановке прямого варианта теста предварительную инкубацию с исследуемой сывороткой не производят.

Данный метод применяют для определения аутоантител при ревматоидном артрите , антител к ДНК при системной красной волчанке , а также для доказательства выработки антител к антигенам на лейко- и тромбоцитах. Метод зависит и от многочисленных неспецифических факторов - вот почему особую важность приобретают соответствующие способы контроля. При интерпретации результатов не следует забывать, что общепринятая техника может демонстрировать связывание глобулинов, не всегда обусловленное комплексом антиген-антитело.

Реакция связывания комплемента . Это непрямой метод для выявления антител или антигенов. Реакция основана на том, что комплемент принимает участие в многочисленных реакциях типа антиген-антитело. Постановку опыта осуществляют в два этапа: на I этапе исследуемую сыворотку и известный антиген инкубируют с комплементом, на II - готовят индикаторную систему, состоящую из гемолитической сыворотки и эритроцитов, и добавляют к смеси реагентов. Если I этап опыта завершается реакцией антиген-антитело, то происходит связывание комплемента, при этом гемолиз индикаторных эритроцитов отсутствует или выражен незначительно. Если в исследуемой системе не образуется комплекс антиген-антитело, то комплемент полностью включается в индикаторную систему, что приводит к гемолизу. В качестве источника комплемента обычно служит свежая сыворотка крови морской свинки. Ее комплемент реагирует с антителами всех видов млекопитающих. В индикаторной системе используют, как правило, эритроциты барана, сенсибилизированные кроличьими антителами к эритроцитам барана.

Реакция иммунного гемолиза и цитотоксический тест . Иммунный гемолиз может служить доказательством, с одной стороны, активности комплемента, с другой - цитотоксического эффекта антител к эритроцитам, поэтому указанные реакции важны для иммуногематологической диагностики. Пассивную гемагглютинацию можно преобразовать в реакцию пассивного гемолиза, при этом смесь реагентов должна состоять из антител, эритроцитов, нагруженных соответствующим антигеном, и комплемента.

Цитологический тест информативен при изучении патогенетических механизмов. Тем не менее возможности его использования довольно ограничены, учитывая сложность методов клеточного культивирования. Цитотоксические реакции могут быть опосредованы антителами (активация комплемента), клетками-киллерами и сенсибилизированными Т-лимфоцитами.

Тест нейтрализации . Принцип теста состоит в том, что определенные биологические свойства антигена нейтрализуются при воздействии антител. Наиболее широко его применяют для выявления антитоксических (столбняк , дифтерия) и антивирусных антител.

Прочие методы . Кроме методов, ранее описанных в отдельных главах (анафилаксия in vitro по Шульцу-Дейлу, освобождение гистамина из базофильных гранулоцитов и тучных клеток, кожные пробы, «разрешающая» доза аллергена как тест оценки иммунного ответа, пассивная кожная анафилаксия и реакция Прауснитца-Кюстнера), следует назвать способы доказательства продукции IgE, диагностические тесты для анализа иммунных комплексов, методы выявления аутоантител при аутоиммунных заболеваниях.

Гуморальный иммунитет оценивают с помощью определения количества В-лимфоцитов, концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов М, G, А и титров сывороточных антител к различным антигенам. Сюда же относится выявление гетерофильных антител к кишечной палочке и стафилококку, а также тесты на иммунные комплексы антиген - антитело.

Метод комплементарного розеткообразования. Метод учитывает тот факт, что на мембране В-лимфоцитов расположены рецепторы к Fc-фрагментам иммуноглобулинов и к третьему компоненту комплемента.

Нагружая эритроциты человека иммуноглобулинами или комплексом иммуноглобулинов и комплемента, добиваются соединения эритроцитов с В-лимфоцитами. Как и при подсчете Т-лимфоцитов, розеткообразующим считается лимфоцит, к которому прикреплено не менее трех эритроцитов.

На мембране В-лимфоцитов имеются также рецепторы к эритроцитам мыши. В связи с этим ряд авторов предлагают определять число В-лимфоцитов с помощью метода спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши. Более точные методы выявления В-лимфоцитов основаны на обработке лимфоцитов флюоресцентными антииммуноглобулиновыми сыворотками против того или иного класса иммуноглобулинов.

При этом подсчет В-лимфоцитов производят с помощью флюоресцентного микроскопа или автоматического лазерного сортера клеток с использованием моноклональных антител. В периферической крови здорового человека В-лимфоциты составляют 10 - 30% общего числа лимфоцитов, или 100 - 900 клеток в 1 мм 3 крови.

Определение концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови. Наибольшее распространение получил метод радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини. Принцип метода заключается в том, что образцы исследуемых сывороток помещают в лунки агара, содержащего антитела против того или иного класса иммуноглобулинов. Иммуноглобулины из сыворотки диффундируют в агар и взаимодействуют с антителами, образуя кольца преципитации. О содержании иммуноглобулинов в сыворотке судят по величине диаметра кольца преципитации.

Существует также методика определения концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови с помощью лазерной нефелометрии. Она предполагает использование моноспецифических кроличьих антисывороток против иммуноглобулинов человека, отличается высокой точностью и быстротой исполнения.

Нормальным считается следующее содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови здорового человека: М - 0,5 - 2 г/л, G - 7 - 20 г/л, А - 0,7 - 5 г/л.

Определение изогемагглютининов (альфа-, бета) и гетерофильных антител. Уровень изогемагглютининов определяют с помощью эритроцитов человека АВ (IV) группы крови, а для определения титра гетерофильных антител в качестве антигенов используют убитую культуру кишечной палочки, стафилококка, стрептококка и других часто встречающихся микробных тел.

Реакцию агглютинации ставят с сывороткой крови человека в разных разведениях, кратных 2. Метод полуколичественный и позволяет учитывать последнее разведение сыворотки, в которой видна агглютинация.

Изучение антителогенеза после активной иммунизации. Этот метод используют редко. Он доступен только в условиях клиники и применяется для решения вопроса о полноценности иммунного ответа.

Обследуемого больного активно иммунизируют различными убитыми вакцинами: дифтерийной, столбнячной, пневмококковой, менингококковой и др. По величине титров антител в сыворотке крови определяют полноценность иммунного ответа. Эти исследования противопоказаны при заболеваниях почек, печени, аллергических состояниях и у онкологических больных.

РБТЛ, стимулированная специфическими для В-лимфоцитов митогенами. Специфичным для В-лимфоцитов является митогенлаконоса, принцип реакции аналогичен таковой для Т-лимфоцитов.

Биопсия лимфатических узлов, костного мозга, участков слизистой оболочки тонкого кишечника. Эту процедуру проводят с целью гистологического обнаружения плазматических клеток, наличия и структуры лимфоидных фолликулов.

Дефектность гуморального иммунитета принято определять как по уменьшению числа В-лимфоцитов, так и по понижению концентрации иммуноглобулинов и титров антител. Кроме того, наблюдаются дисфункции, при которых развиваются дисгаммаглобулинемии, характеризующиеся повышением концентрации иммуноглобулинов одного из классов и понижением содержания иммуноглобулинов других классов.

Понижение или повышение концентрации иммуноглобулинов одного или двух классов возникает также на фоне нормального содержания других классов иммуноглобулинов. Успех коррекции подобных расстройств зависит от правильности клинического диагноза и рационального лечения основного заболевания с применением иммунотропных препаратов.


«Коррекция иммунитета у больных раком
предстательной железы», В.А.Савинов