Ложноотрицательный анализ вассермана. Кровь на реакцию вассермана. Подготовка к процедуре

Практиковавшаяся в медицине более столетия, диагностическая реакция Вассермана – одно из широко известных исследований. Разработанная немецким врачом Августом фон Вассерманом для облегчения диагностики начальных и неактивных форм сифилиса, эта иммунологическая реакция сразу вошла в круг лечебной деятельности и доказала свою пользу.

Что вызвало такую однозначно позитивную оценку применению исследования пробы крови пациента для диагностики ?

Появившаяся у врачей возможность подтверждения диагноза сифилиса посредством простого анализа крови на RW (реакцию Вассермана).
Результаты проводимого лечения и его эффективность стало можно контролировать с помощью конкретного показателя.
По положительной реакции Вассермана доказательно удавалось установить не только сам факт заражения, но и ориентировочно – время момента заражения.

Анализ крови на реакцию Вассермана

Со временем выявилось много недостатков популярного исследования крови. Если отрицательная реакция Вассермана обычно была достаточно достоверной, то положительный результат часто мог быть вызван другими причинами. При этом число возможных оснований для ошибочного позитивного результата со временем неуклонно увеличивалось.

Положительная реакция отмечалась при некоторых заболеваниях (малярия, туберкулез, системная , лептоспироз, проказа, болезни крови). И даже после прививки или острой вирусной инфекции.

В СССР со второй половины пятидесятых годов прошлого века классическая реакция Вассермана всегда дублировалась проведением дополнительно еще двух обязательных исследований – реакцией Кана и цитохолевой реакцией.

В настоящее время классическая реакция Вассермана не используется. Но, по устоявшейся привычке, врачи часто называют так любую реакцию диагностического исследования крови на сифилис.

Сифилиса является распространенным венерическим заболеванием, если вовремя его не обнаружить, то организм получит серьезные повреждения и возможен летальный исход. Реакция Вассермана – специальный анализ, который должен делаться при подозрении на эту патологию, своевременная диагностика поможет сразу же вылечить болезнь при положительном результате. Заразиться сифилисом можно не только при половом контакт, но и через бытовые предметы, средства гигиены, постельное белье.

Методы диагностики сифилиса

Тесты должны выявить основного возбудителя болезни – treponema pallidum она же бледная трепонема. Для этого натощак делают забор крови для проведения серологического анализа. Такое исследование принято считать основным видом лабораторной диагностики для выявления сифилиса. Самыми распространёнными методами исследования являются:

анализ крови на РВ (RW) – анализ Вассермана;
РПГА – реакция пассивной гемагглютинации;
ИФА – иммуноферментный анализ крови;
РИФ – реакция иммунофлюоресценции;
RPR – реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном;
РИБТ – реакция иммобилизации бледных трепонем.

Что такое реакция Вассермана

Это лабораторный анализ крови на сифилис, который направлен на определение иммунологической реакции на проникновение возбудителя в организм. В теле человека начинаются характерные процессы при заражении. Возбудитель заболевания содержит антиген кардиолипин. Сыворотка крови пациента из-за присутствия в ней реагинов вступает в реакцию связывания комплемента. В результате получается специфический комплекс с этим антигеном, который и способна выявить РВ.

При заражении сифилисом у человека в крови обязательно будут антитела к бледной трепонеме, что характеризуется как физиологический ответ иммунной системы. При проведении теста к забранной крови добавляется препарат кардиолипином. Если возбудитель сифилиса уже находится в организме, в результате будет виден РСК, которая связывает введенный антиген и антитела. В расшифровке количество знаков «+» указывает на интенсивность образования комплексов или «-» при их отсутствии.

Показания к исследованию

Рекомендуется регулярно проводить общий анализ крови, чтобы вовремя выявлять любые отклонения в организме человека, на ранней стадии постановка реакции позволяет значительно повысить эффективность лечения. Для сдачи сыворотки на RW существуют следующие показания:

При профосмотрах, медицинских обследованиях на регулярной основе у сотрудников торговли, медицины, образования.
Во время беременности. Существует вероятность заражение сифилисом плода в утробе, поэтому важно выявить результат на анализ Вассермана у женщин, которые планируют родить ребенка или уже вынашивают его. Патология способна нанести серьезный вред малышу.
Людям, у которых был длительные контакты с патологией на работе или в быту.
Если человек страдает алкоголизмом или наркоманией.
При срочной госпитализации больного с признаками сифилиса.
После интимной близости без использования контрацептива со случайным человеком.
Обязательно проходят проверку все желающие стать донором крови или спермы.
Если была прервана беременность неестественным путем.
Проводят тест во время и после отбывания срока в местах лишения свободы.
Поводом для проведения РВ становится госпитализация пациента с увеличенными узлами лимфатической системы и повышенной температурой.

Кровь на реакцию Вассермана при беременности

Это первичный тест, который акушер-гинеколог попросит вас сдать. Анализ крови на реакцию Вассермана может быть неточным, потому что состояние женщины в этот период сказывается на результаты. По статистике 32% случаев показывают ложноположительный результат. При наличии «+» в расшифровке необходимо пройти дифференциальную диагностику. Рекомендуется выполнять тест один раз за триместр вне зависимости от наличия или отсутствия полового контакта. Противопоказаний для проведения RW для беременных нет, это стандартный забор материала.

Подготовка

Некоторые тесты требует специфической подготовки перед сдачей. Анализ Вассермана будет максимально достоверным, если за 2 суток до прохождения исследования вы не будете пить любые спиртные напитки (даже слабоалкогольные). Рекомендуется в этот же период не есть жирную пищу, чтобы не исказить результаты. Нельзя во время подготовки к РВ принимать любые препараты наперстянки.

Как проводится процедура

Кровь на реакцию Вассермана проводится только натощак, это важное условие. Последний прием пищи до забора должен быть не позднее, чем за 6 часов. Сотрудник, который проводит манипуляции, садит клиента на стул или укладывает на кушетку. Для анализа требуется 8-10 мл крови ил локтевой вены. Если исследование проводится маленькому ребенку, то взять материал могут из яремной или черепной вены.

Сколько дней делается анализ крови на RW

Есть два этапа проведения исследования материала. Экспресс-тест Вассермана будет готов через 2 часа, но он сможет только подтвердить или опровергнуть наличие антител сифилиса у пациента. Чтобы получить количественную информацию по состоянию крови, концентрацию антител к трепонеме, нужно от 1 до 7 суток. Продолжительность проведения анализа и расшифровки зависит от лаборатории, количества текущих анализов.

Расшифровка

Исследование крови по Вассерману должен расшифровывать только квалифицированный врач. Результаты могут указывать не только на отрицательную или положительную реакцию, но и на промежуточную. Только специалист сможет правильно интерпретировать данные и не пугать раньше времени пациента. Типичный отрицательный результат обозначается знаком «-» и говорит о несомненном отсутствии сифилиса в организме человека.

Положительная реакция

При оценке концентрации антител положительное проявление может отмечаться одним, двумя, тремя или четырьмя плюсами. В расшифровке могут встречаться следующие обозначения:

«+» и «++» - результат указывает на сомнительную, слабоположительную микрореакцию. Необходимо провести дополнительные диагностические анализы и обследование. Можно через некоторое время повторить анализ Августа Вассермана, потому что полной уверенности в отсутствии или наличии сифилиса нет. Причиной такого результата может стать нарушение подготовительных процедур перед сдачей крови.
«+++» - положительная реакция. Дополнительного или повторного подтверждения не требуется, у пациента есть сифилис и должен пройти полное обследование. Женщинам назначают мазок из влагалища или матки, мужчины сдают материал из уретры. Такой результат редко бывает ошибочным, но могут назначить уточняющие анализы, если симптомы больного схожи на другие заболевания.
«++++» - окончательный положительный результат. Высокая интенсивность реакции.
«++++» - окончательная положительная реакция. Полученный результат достоверный на 100% и не требует никаких дополнительных анализов. Диагноз – сифилис.

Реакция Вассермана, успешно используемая для диагностики и контроля эффективности лечения сифилиса, широко применяется при массовых обследованиях доноров, беременных женщин, работников образовательных учреждений, торговли и общественного питания.

Реакция Вассермана - как сдавать анализ?

Данный анализ является одним из основных серологических исследований. Кровь для анализа рекомендуется сдавать натощак. Это связано с тем, что употребление алкогольных напитков и жирной пищи может отразиться на точности полученных результатов. Забор крови производится как из вены, так и из пальца.

Ложная реакция Вассермана

В основе реакции Вассермана лежит выработка иммунной системой антител в сыворотке крови заболевшего человека. Выявляются антитела в результате лабораторного исследования антигена – кардиолипина. Положительной реакция считается в случае обнаружения антител в исследуемом образце крови. Однако, нередки случаи так называемой ложноположительной реакции Вассермана. Это связано с парадоксальной реакцией иммунитета человека, когда иммунная система начинает бороться с клетками собственного организма. Именно при таком варианте развития событий в крови тестируются те же противолипидные антитела, что и при заболевании сифилисом.

Причины ложноположительная реакция Вассермана

По данным статистики подобные результаты встречаются в 0,1-2% случаев от общего числа исследований. Возможными причинами могут быть:

вирусные инфекции (гепатит, кишечные инфекции, малярия, );
системные заболевания (красная волчанка, дерматомиозит, склеродермия и прочие);
сердечные воспалительные заболевания;
беременность;
заболевания крови;
прием алкоголя и наркотиков.

Ложноположительная реакция Вассермана в некоторых из перечисленных случаев через определенный продолжительный период (год и более) может становиться отрицательной даже без всякого лечения.

Постановка диагноза ложноположительная реакция Вассермана при беременности является стрессовым фактором для женщины, готовящейся к материнству. Для исключения постановки ошибочного диагноза в таких случаях рекомендовано повторное серологическое исследование, которое проводится через 2 недели после первого. Лечение может быть назначено только после повторного установления резкоположительной реакции.

Как правило, неспецифическая серологическая реакция в большинстве случаев бывает слабоположительной. Следует также учитывать, что выявление слабоположительной реакции Вассермана может зависеть и от методической чистоты и техники постановки исследования.

Реакция Вассермана (RW) используется уже более 100 лет и доказала свою эффективность в ранней диагностике сифилиса. Эта методика исследования крови достаточно проста, но в то же время очень надежна, что позволяет широко применять ее по всему миру в усовершенствованном виде. Современные активно используемые экспресс-тесты существенно отличаются от классической реакции Вассермана, но в них закладывается основной принцип этой методики, что позволяет часто давать им прежнее название.

Принципиальный подход

По своей сути, реакция Вассермана - это лабораторный анализ кровяной сыворотки, направленный на определение иммунологической реакции организма на проникновение в него возбудителя сифилиса. При заражении сифилисом происходит характерный процесс. Бледная трепонема (Treponema pallidum), содержит антиген кардиолипин. Кровяная сыворотка за счет наличия реагинов вступает в, так называемую, реакцию связывания комплемента (РСК) с образованием специфического комплекса с этим антигеном, т.е. антитела к трепонеме вступают в соединение с трепонемным антигеном.

Принцип реакции Вассермана основан на выявлении указанной реакции. Если человек заражен сифилисом, то в его крови обязательно появляются антитела к бледной трепонеме, что является физиологическим ответом иммунной системы. Для искусственного провоцирования специфической реакции в кровь вводится препарат, содержащий трепонемный антиген (кардиолипин). Одновременно вводится гемолитическая система для проведения реакции гемолиза, а для сорбции комплексов используется комплемент.

В случае когда возбудитель сифилиса уже проник в человеческий организм, начинается РСК, связывающая антитела в крови с введенным антигеном с образованием специфического комплекса. На эту реакцию расходуется весь вводимый антиген и комплемент. Если антител нет в крови пациента, то кардиолипин вступает в реакцию гемолиза с гемолитической системой, которая полностью его нейтрализует. Проводимый лабораторный анализ выявляет комплексы антитело-антиген, которые обнаруживаются визуально. Концентрация комплексов показывает интенсивность их образования и условно оценивается по количеству знаков (плюс): от (+) до (++++). Исследования на RW можно проводить на кровяной сыворотке или спинномозговой жидкости.

Реакционный состав

Для обеспечения RW в кровь исследуемого человека вводится специальная смесь, которая содержит 3 основных ингредиента: антиген, комплемент и гемолитическую систему. Главную реакцию Вассермана обеспечивает антиген, представляющий собой искусственно приготовленный антиген возбудителя. Он может готовиться в 2 вариантах: обработанная ультразвуком культура бледной трепонемы или кардиолипин, получаемый из бычьего сердца. Чаще всего используется второй вариант, когда препарат приготавливается путем тщательной очистки спиртового липидного экстракта, получаемого из мышечных тканей бычьего сердца. Для повышения активности антигена добавляют фосфолипид, лецитин и холестерин. Необходимая доза антигена обеспечивается разведением его в растворе хлорида натрия.

Гемолитическая система соединяет в себе гемолитическую сыворотку (гемолизин) и эритроциты из крови барана. Сыворотку получают из крови кроликов и ослов, а затем ее иммунизируют эритроцитами барана. Эритроциты выделяются из крови барана в возрасте 1-4 года, а забирается она из яремной вены. Комплемент приготавливается из кровяной сыворотки, получаемой из сердца морских свинок. Для проведения RW указанные ингредиенты берутся в равном количестве - по 0,25 или 0,5 мл.

Как проводится анализ крови

Кровь у пациента на анализ берется натощак или через 7-8 часов после приема пищи. Нельзя брать пробы в следующих обстоятельствах: повышенная температура тела, после недавно перенесенной болезни инфекционного характера, во время месячных у женщин, за 12-15 дней до родов у беременных женщин, сразу после родов, в течение суток после приема алкоголя. Не следует брать анализ у новорожденных детей в первые 2 недели жизни.

Кровь для проведения исследований отбирается из локтевой вены в объеме порядка 9-10 мл с соблюдением всех антисептических правил. У младенцев кровь берется путем надреза пятки специальным скальпелем. На проведение реакции проба должна поступить в течение 2 суток после отбора крови и при условии хранения при температуре не выше 3-4ºС.

Из крови пациента приготавливается сыворотка в следующем порядке. Кровь выдерживается при температуре 37ºС в термостате в течение 18-28 минут, а образовавшийся кровяной сгусток отделяется и поступает на центрифугу, где обрабатывается на скорости порядка 1000 об/мин в течение 14-16 минут. После такой процедуры над сгустком появляется прозрачная кровяная сыворотка, которая и забирается для дальнейших исследований. Если в сыворотке обнаруживаются эритроциты, то проводится повторное центрифугирование для их отделения. Окончательно выделенная сыворотка проходит инактивацию при 55-57ºС в течение 28-35 минут. Таким образом удаляется натуральный комплемент и нормализуется состояние глобулинов. Полностью подготовленная кровь хранится в холодильнике не более 7 дней.

Определение реакции Вассермана кровяной сыворотки осуществляется в 3 пробирках: во все пробирки наливается сыворотка, разведенная раствором хлорида натрия в пропорции 1:5, а затем в первую пробирку вводится 0,25 мл трепонемного антигена, во вторую - 0,25 мл кардиолипина, а в третью (контрольную) - 0,25 мл раствора хлорида натрия. Затем во все пробы вводится такое же количество комплемента. Необходимо отметить, что смешивание компонентов заранее не производится.

Следующий этап - первичная инкубация в термостате при температуре 36-38ºС в течение 46-55 минут. После тепловой обработки вводится гемолитический состав (по 0,5 мл в каждую пробирку) с перемешиванием путем встряхивания. Далее осуществляется окончательная инкубация в аналогичных условиях до полного завершения операции гемолиза. Внимательно оценивается наличие или отсутствие гемолиза. Оценку результатов реакции проводят путем сравнения с контрольными образцами. Для этой цели используется 2 дополнительные пробирки: в одну помещается кровь, в которой достоверно установлен возбудитель сифилиса, а в другую - кровь абсолютно здорового человека.

Исследование спинномозговой жидкости

Антитела к бледной трепонемы могут располагаться в спинномозговой жидкости, поэтому иногда исследования на реакцию Вассермана проводятся на пробах этой жидкости. Пробы исследуются одновременно в 3 вариантах: неразведенная спинномозговая жидкость, разведенная в соотношении 1:2 с раствором хлорида натрия и разведенная с тем же раствором в пропорции 1:5. Реакцию проводят аналогично с исследованием кровяных проб, т.е. с трепонемным антигеном и кардиолипином. Комплемент вводится по специальным титрам. Сама методика проведения реакции и оценка исследования спинномозговой жидкости не отличается от исследования на кровяной сыворотке.

Как оцениваются результаты

Нормой или отрицательным результатом реакции Вассермана (отсутствие заражения сифилисом) считается протекание реакции гемолиза. В этом случае в крови отсутствуют антитела к сифилитическому возбудителю, а все введенные антигены нейтрализуются гемолитической системой.

Положительный результат, т.е. наличие заражения, оценивается путем сравнительного анализа с контрольными образцами. Степень тяжести болезни или ее стадия обозначается количеством знаков "плюс":

(+) или (1+): небольшая задержка гемолиза;
(++) или (2+): слабо положительная реакция или частичная задержка гемолиза;
(+++) или (3+): положительная реакция или значительная задержка гемолиза;
(++++) или (4+): резко положительная реакция или полное отсутствие гемолиза.

Кроме того, существует такое понятие, как сомнительная реакция, обозначающаяся в виде (+/-). Такая реакция требует перепроверки и уточнения. При проведении оценки реакции Вассермана следует учитывать такой факт: у 4-6% здоровых людей наблюдается ложноположительный результат, а у зараженных людей (до 25%) может наблюдаться ложноотрицательный результат в течение 14-18 суток после инфицирования бледной трепонемой. Ложноотрицательные результаты меняются по мере развития болезни: после 4-6 недель болезни до 26% результатов становятся положительными, а к 8-9 неделе почти все они дают положительную реакцию.

Отрицательный результат в скрытом периоде второй фазы сифилиса не всегда свидетельствует об отсутствии болезни. При рецидиве сифилиса реакция становится положительной. После проведения лечебного курса отрицательный результат указывает только на благоприятную тенденцию, но требует перепроверки. Другая проблема оценки эффективности лечения - появление синдрома, так называемого серорезистентного сифилиса, когда после излечения реакция Вассермана все равно дает отрицательный результат.

Реакция Вассермана в большинстве случаев достаточно четко выявляет заражение сифилисом, однако в ряде случаев отрицательная реакция не дает гарантии отсутствия инфекции, также как и положительный результат может появиться и при отсутствии сифилиса.

В частности, ложноположительная реакция может возникнуть в следующих случаях:

Ложный результат может проявиться даже при употреблении жирной пищи непосредственно перед исследованиями.

Результаты реакции Вассермана нельзя расценивать как истину в последней инстанции. Они, скорее, дают импульс для проведения дополнительных обследований. Для этих целей в настоящее время применяются различные трепонемные тесты. К современным методикам экспресс-диагностики сифилиса относятся усовершенствованные аналоги реакции Вассермана: тест RPR, который дополняется трепонемными тестами РПГА.

Реакция Вассермана сыграла огромную роль в развитии диагностирования сифилиса на ранних стадиях. Однако ее результаты не всегда однозначно оценивают наличие болезни, в связи с чем в настоящее время применяются более совершенные способы, принцип функционирования которых взят из классической реакции Вассермана. Исследования данного типа, в основном, продолжают использоваться при контроле лечебного процесса, но могут применяться и для выявления сифилиса.

Необходимо это исследование для того, чтобы подтвердить наличие или отсутствие у человека такого заболевания, как сифилис.

Реакция по Вассерману, что это?

Анализ крови на реакцию Вассермана основан на способности трепонемы, которая является возбудителем сифилиса, вырабатывать антиген кардиолипин. В ответ на его появление в крови иммунная система человека производит антитела, которые связываются с этим антигеном и образуют прочный комплекс.

Если же антитела в крови не образовались, то кардиолипин связывается с эритроцитами и вызывает их разрушение – гемолиз.

Критерием оценки служат титры анализа крови на реакцию Вассермана . Упрощенно, титр – это способ выражения концентрации антител и антигенов, при которой происходит значимая или полная задержка гемолиза. Если сифилис есть, то титр начинает возрастать примерно на четвертой неделе после заражения и достигает своего максимума во вторичном периоде болезни.

А вот в третичном, наоборот, уменьшается.

Говорить о наличии болезни можно, если титры антител в анализе находятся в пределах от 1:2 до 1:800. При этом значение имеет максимальный показатель разведения, при котором еще сохраняется резко положительная реакция.

Зачем сдавать кровь на реакцию Вассермана?

Исследование может проводиться не только при подозрении на сифилис. В обязательном порядке сдают кровь на реакцию Вассермана при беременности . Причем трижды: когда становятся на учет, на сроке в тридцать недель и перед родами.

Также это исследование назначают:

При поступлении в больницу и перед операциями.
При устройстве на работу, например, в кафе, рестораны, детские учреждения или магазины.
Донорам, сдающим сперму или кровь.
При обнаружении других заболеваний, которые передаются половым путем, например, хламидиоза или трихомоноза.
При болях в суставах, появлении безболезненных язвочек, длительном, более одного месяца, повышении температуры и при увеличении регионарных лимфатических узлов.

Анализ крови на реакцию Вассермана, как сдавать?

Никаких особых приготовлений этот анализ от вас не потребует. Однако, чтобы максимально снизить риск ошибочных результатов лучше соблюдать несложные правила.

Если вам предстоит сдать кровь на реакцию Вассермана , то:

За три дня до исследования откажитесь от лекарств.
Если же это невозможно, обязательно скажите врачу, какие препараты принимаете.
За 12 часов откажитесь от кофе, крепкого чая и алкоголя.
Откажитесь от еды за 8 часов до анализа. Лучше кровь на реакцию Вассермана сдавать натощак , так как жирная, белковая пища способна исказить результаты.
Как минимум за один час до посещения лаборатории откажитесь от сигарет. Не забудьте сообщить врачу о том, есть ли у вас хронические заболевания, такие, например, как сахарный диабет.

Если вы планируете сдать анализ крови на реакцию Вассермана , то цена будет определяться тем, в каком регионе и учреждении вы решили это сделать. В государственных клиниках это возможно сделать бесплатно. В частных стоимость способна колебаться от 300 до 1000 рублей.

Какие могут быть результаты исследования?

В норме анализ крови должен давать отрицательный результат, который означает, что сифилиса нет.

Категории

Выбор редакции