Главная > Эстрогены > Прямая проба кумбса в инвитро. Применение такой пробы. Подготовка к анализу и забор материала


Прямая проба кумбса в инвитро. Применение такой пробы. Подготовка к анализу и забор материала




Прямая проба Кумбса (антиглобулиновый тест)- положительная реакция определяет антитела (антиэритроцитарные антитела - анти-D, С, Е, с и е) или компоненты комплемента, фиксированные на поверхности эритроцитов в крови больных аутоиммунными гемолитическими анемиями. Отрицательная реакция не исключает иммунное заболевание, поскольку антитела могут находиться в свободном виде в плазме (не связанные с эритроцитами). Для их обнаружения проводят непрямую пробу Кумбса.

Показания к назначению: установление иммунной природы гемолитической анемии.

Положительная реакция выражается в том, что эритроциты больного человека, с фиксированными на них антителами, при взаимодействии с антиглобулиновой сывороткой (против антител), полученной после иммунизации кролика, агглютинируют. Прямая проба Кумбса проводится, когда есть основания предполагать, что исследуемые эритроциты уже in vivo подверглись сенсибилизации соответствующими антителами, т.е. первая фаза реакции - фиксация антител на поверхности эритроцитов уже произошла и добавление антиглобулиновой сыворотки вызывает агглютинацию сенсибилизированных клеток. Иными словами, положительная прямая реакция Кумбса подразумевает, что in vivo на поверхности эритроцитов имеются покрыты иммуноглобулины или комплемент.

С помощью прямой пробы Кумбса выявляют иммуноглобулины (антитела) на поверхности эритроцитов. Это иммуноглобулины, образующиеся в ответ на сенсибилизацию к каким-либо антигенам, например резус-фактору. Для постановки пробы сыворотку с антиглобулином (сыворотка Кумбса) добавляют к отмытым эритроцитам. Если на эритроцитах имеются иммуноглобулины или комплемент, происходит агглютинация. Проба называется прямой, так как она одноступенчатая - требует только добавления сыворотки Кумбса к отмытым эритроцитам.

Реакция Кумбса

Реакция Кумбса - антиглобулиновый тест для определения неполных антиэритроцитарных антител. Тест Кумбса используется для выявления антител к резус-фактору у беременных женщин и определения гемолитической анемии у новорождённых детей с резус-несовместимостью, влекущей разрушение эритроцитов . Данный метод был предложен английским врачом Робертом Кумбсом в 1945 году, в связи с чем впоследствии получил название «реакция Кумбса».

Прямая реакция Кумбса

Антитела , находящиеся на поверхности эритроцитов, могут быть как в статичном, так и в свободном состоянии в плазме крови . В зависимости от состояния антител проводится прямая или непрямая реакция Кумбса. Если есть основания для предположения, что антитела зафиксированы на поверхности эритроцитов, проводится прямой тест Кумбса. В этом случае тест проходит в один этап - добавляется антиглобулиновая сыворотка. Если на поверхности эритроцитов присутствуют неполные антитела, происходит агглютинация эритроцитов.

Непрямая реакция

Непрямая реакция Кумбса протекает в 2 этапа. Сначала необходимо искусственно осуществить сенсибилизацию эритроцитов. Для этого эритроциты и исследуемую сыворотку крови инкубируют, что вызывает фиксацию антител на поверхности эритроцитов. После чего проводится второй этап теста Кумбса - добавление антиглобулиновой сыворотки.

Примечания


Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Реакция Кумбса" в других словарях:

    РЕАКЦИЯ КУМБСА - (Coombs test) метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых… … Толковый словарь по медицине

    Метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых наблюдается… … Медицинские термины

    - (антиглобулиновал проба) метод обнаружения естественно или искусственно связанных с клетками (обычно с эритроцитами) неполных Ат с помощью антиглобулиновой с ки (А. с.). А. с., преципитируя неполные Ат, включает в этот процесс клетки носители,… … Словарь микробиологии

    КУМБСА РЕАКЦИЯ - (по имени британского иммунолога R. R. A. Coombs, род. в 1921, синоним – антиглобулиновая проба) – серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто– и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки. При… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

    РЕАКЦИЯ ТРАНСФУЗИОННАЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ - мед. Трансфузионная гемолитическая реакция (ТГР) гемолиз эритроцитов реципиента или донора (редко), возникающий при переливании крови и её компонентов. Реакции могут быть иммунной или неиммунной природы. Этиология и патогенез Иммунные реакции… … Справочник по болезням

    - (R. R. A. Coombs, род. в 1921 г., англ. иммунолог) серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки; применяется в трансфузиологии, судебной медицине, а также… … Большой медицинский словарь

    КУМБСА РЕАКЦИЯ - Кумбса реакция, серологическая реакция, позволяющая обнаружить неполные антитела, фиксированные на поверхности эритроцитов или содержащиеся в плазме крови. К. р. основана на применении антиглобулиновой сыворотки, получаемой путём гипериммунизации … Ветеринарный энциклопедический словарь

    КУМБСА РЕАКЦИЯ - Используется для обнаружения моновалентных или так называемых неполных антител, в частности для анализа групп крови свиней и некоторых других животных … Термины и определения, используемые в селекции, генетике и воспроизводстве сельскохозяйственных животных

    См. Кумбса реакция. (

Кровь представляет из себя жидкую ткань, в которую включаются: тромбоциты, лейкоциты, эритроциты и плазма. Выполняя основные жизненные функции, кровь играет значимую роль в функционировании человеческого организма и часто используется в медицинских целях. Например, в случаях большой кровопотери появляется потребность в трансфузии крови реципиенту от донора.

Выявление группы крови перед трансфузией

Сегодняшние изосерологические исследования дают возможность производить типирование крови по антигенам эритроцитов. Для этого обязательно производятся анализы на определение совместимости крови реципиента и донора, а также анализы на определение группы крови по системе АВ0 и другие анализы, в частности реакция Кумбса.

Для уменьшения риска для жизни больного производят типирование крови, потому как даже с одинаковыми группами крови, донор и реципиент могут не совпадать по иным параметрам. После определения резус-фактора и группы крови, делается анализ на совместимость - рецепиент и донор совместимы, если при анализе не случается гемолиза (разрушения эритроцитов) или агглютинации (склеивания эритроцитов).

Уменьшить угрозу для жизни больного позволяет как раз типирование крови. Помимо определения группы крови и резус-фактора, перед трансфузией проводится множество других необходимых лабораторных анализов. Определение группы крови - это основной анализ, который производится перед любым медицинским вмешательством, у новорожденных, во время беременности.

Реакция Кумбса

Для выявления гемолитической болезни у новорожденных детей и выявления антител к резус-фактору у беременных женщин осуществляется реакция Кумбса. Данный тест имеет важное значение, так как резус-несовместимость ребенка и матери может привести к гемолитическому заболеванию новорожденного, а при раннем проявлении явиться причиной преждевременных родов.

Прямая и непрямая реакция Кумбса

Тест Кумбса протекает в 1 либо 2 этапа, в зависимости непрямой он или прямой. В случае проведения прямой реакции Кумбса к сыворотке крови добавляется антиглобулиновая сыворотка, при условии, что антитела были зафиксированы на поверхности эритроцитов, и происходит агглютинация эритроцитов.

Непрямой тест Кумбса проводится в случае, когда в плазме крови антитела располагаются в свободном состоянии. Изначально надо зафиксировать антитела на эритроцитах, для этого инкубируют эритроциты и сыворотку крови. Затем добавляют антиглобулиновую сыворотку.

Антиглобулиновая сыворотка

Для реакции Кумбса применяется антиглобулиновая сыворотка - реагент, который имеет антитела к иммуноглобулинам человека. Антиглобулиновую сыворотку еще применяют в генетике, судебной медицине, акушерстве и прочих медицинских сферах.

Выявление резус-принадлежности, определение иммунных антител системы АВ0, аллоиммунных антиэритроцитарных антител - это даже не весь перечень возможностей применения антиглобулиновой сыворотки в сфере медицины.

  • 1.Медицинская микробиология. Предмет, задачи, методы, связь с другими науками. Значение медицинской микробиологии в практической деятельности врача.
  • 3. Микроорганизмы и их положение в системе живого мира. Номенклатура бактерий. Принципы классификации.
  • 6. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
  • 7.Питание бактерий. Типы и механизмы питания бактерий. Аутотрофы и гетеротрофы. Факторы роста. Прототрофы и ауксотрофы.
  • 8.Питательные среды. Искусственные питательные среды: простые, сложные, общего назначения, элективные, дифференциально-диагностические.
  • 9. Бактериологический метод изучения микроорганизмов. Принципы и методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.
  • 13. Спирохеты, их морфология и биологические свойства. Патогенные для человека виды.
  • 14. Риккетсии, их морфология и биологические свойства. Роль риккетсий в инфекционной патологии.
  • 15. Морфология и ультраструктура микоплазм. Виды, патогенные для человека.
  • 16. Хламидии, морфология и другие биологические свойства. Роль в патологии.
  • 17. Грибы, их морфология и особенности биологии. Принципы систематики. Заболевания, вызываемые грибами у человека.
  • 20. Взаимодействие вируса с клеткой. Фазы жизненного цикла. Понятие о персистенции вирусов и персистентных инфекциях.
  • 21. Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Методы культивирования вирусов.
  • 24. Строение генома бактерий. Подвижные генетические элементы, их роль в эволюции бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды изменчивости: фенотипическая и генотипическая.
  • 25. Плазмиды бактерий, их функции и свойства. Использование плазмид в генной инженерии.
  • 26. Генетические рекомбинации: трансформация, трансдукция, конъюгация.
  • 27. Генная инженерия. Использование методов генной инженерии для получения диагностических, профилактических и лечебных препаратов.
  • 28.Распространение микробов в природе. Микрофлора почвы, воды, воздуха, методы ее изучения. Характеристика санитарно-показательных микроорганизмов.
  • 29. Нормальная микрофлора тела человека, ее роль в физиологических процессах и патологии. Понятие о дисбактериозе. Препараты для восстановления нормальной микрофлоры: эубиотики (пробиотики).
  • 31. Формы проявления инфекции. Персистенция бактерий и вирусов. Понятие о рецидиве, реинфекции, суперинфекции.
  • 32. Динамика развития инфекционного процесса, его периоды.
  • 33. Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность. Единицы измерения вирулентности. Понятие о факторах патогенности.
  • 34. Классификация факторов патогенности по о.В. Бухарину. Характеристика факторов патогенности.
  • 35. Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.
  • 36. Неспецифические защитные факторы организма против инфекции. Роль и.И. Мечникова в формировании клеточной теории иммунитета.
  • 37. Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной клетки. Практическое использование антигенов бактерий.
  • 38. Структура и функции иммунной системы. Кооперация иммунокомпетентных клеток. Формы иммунного ответа.
  • 39. Иммуноглобулины, их молекулярная структура и свойства. Классы иммуноглобулинов. Первичный и вторичный иммунный ответ. :
  • 40. Классификация гиперчувствительности по Джейлу и Кумбсу. Стадии аллергической реакции.
  • 41. Гиперчувствительность немедленного типа. Механизмы возникновения, клиническая значимость.
  • 42. Анафилактический шок и сывороточная болезнь. Причины возникновения. Механизм. Их предупреждение.
  • 43. Гиперчувствительность замедленного типа. Кожно-аллергические пробы и их использование в диагностике некоторых инфекционных заболеваний.
  • 44. Особенности противовирусного, противогрибкового, противоопухолевого, трансплантационного иммунитета.
  • 45. Понятие о клинической иммунологии. Иммунный статус человека и факторы, влияющие на него. Оценка иммунного статуса: основные показатели и методы их определения.
  • 46. Первичные и вторичные иммунодефициты.
  • 47. Взаимодействие антигена с антителом in vitro. Теория сетевых структур.
  • 48. Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение.
  • 49. Реакция Кумбса. Механизм. Компоненты. Применение.
  • 50. Реакция пассивной гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.
  • 51. Реакция торможения гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.
  • 53. Реакция связывания комплемента. Механизм. Компоненты. Применение.
  • 54. Реакция нейтрализации токсина антитоксином, нейтрализации вирусов в культуре клеток и в организме лабораторных животных. Механизм. Компоненты. Способы постановки. Применение.
  • 55. Реакция иммунофлюоресценции. Механизм. Компоненты. Применение.
  • 56. Иммуноферментный анализ. Иммуноблотинг. Механизмы. Компоненты. Применение.
  • 57. Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам.
  • 59. Вакцинопрофилактика. Вакцины из убитых бактерий и вирусов. Принципы приготовления. Примеры убитых вакцин. Ассоциированные вакцины. Преимущества и недостатки убитых вакцин.
  • 60. Молекулярные вакцины: анатоксины. Получение. Использование анатоксинов для профилактики инфекционных заболеваний. Примеры вакцин.
  • 61. Генно-инженерные вакцины. Получение. Применение. Преимущества и недостатки.
  • 62. Вакцинотерапия. Понятие о лечебных вакцинах. Получение. Применение. Механизм действия.
  • 63. Диагностические антигенные препараты: диагностикумы, аллергены, токсины. Получение. Применение.
  • 64. Сыворотки. Определение. Современная классификация сывороток. Требования, предъявляемые к сывороточным препаратам.
  • 65. Антительные препараты – сыворотки, применяемые для лечения и профилактики инфекционных заболеваний. Способы получения. Осложнения при применении и их предупреждение.
  • 66. Антительные препараты – сыворотки, применяемые для диагностики инфекционных заболеваний. Способы получения. Применение.
  • 67. Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.
  • 68. Интерфероны. Природа, способы получения. Применение. № 99 Интерфероны. Природа, способы получения. Применение.
  • 69. Химиотерапевтические препараты. Понятие о химиотерапевтическом индексе. Основные группы химиотерапевтических препаратов, механизм их антибактериального действия.
  • 71. Лекарственная устойчивость микроорганизмов и механизм ее возникновения. Понятие о госпитальных штаммах микроорганизмов. Пути преодоления лекарственной устойчивости.
  • 72. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней.
  • 73. Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  • 74. Возбудители эшерихиозов. Таксономия. Характеристика. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Микробиологическая диагностика эшерихиозов.
  • 75. Возбудители шигеллеза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  • 76. Возбудители сальмонеллезов. Таксономия. Характеристи­ка. Микробиологический диагноз сальмонеллезов. Лечение.
  • 77. Возбудители холеры. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профи­лактика и лечение.
  • 78.Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Микроби­ологическая диагностика заболеваний, вызываемых ста­филококками. Специфическая профилактика и лечение.
  • 79. Стрептококки. Таксономия. Характеристика. Микро­биологическая диагностика стрептококковых инфек­ций. Лечение.
  • 80. Менингококки. Таксономия. Характеристика. Микро­биологическая диагностика стрептококковых инфек­ций. Лечение.
  • 81. Гонококки. Таксономия. Характеристика. Микробио­логическая диагностика гонореи. Лечение.
  • 82. Возбудитель туляремии. Таксономия. Характеристи­ка. Микробиологическая диагностика. Специфическая про­филактика и лечение.
  • 83. Возбудитель сибирской язвы. Таксономия и характе­ристика. Микробиологическая диагностика. Специфичес­кая профилактика и лечение.
  • 84. Возбудитель бруцеллеза. Таксономия и характерис­тика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  • 85. Возбудитель чумы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профи­лактика и лечение.
  • 86. Возбудители анаэробной газовой инфекции. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  • 87. Возбудители ботулизма. Таксономия и характеристика Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  • 88. Возбудитель столбняка. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
  • 89. Неспорообразующие анаэробы. Таксономия. Характе­ристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
  • 90. Возбудитель дифтерии. Таксономия и характеристика. Условно – патогенные коринебактерии. Микробиологическая диагностика. Выявления анатоксического иммунитета. Специфическая профилактика и лечение.
  • 91. Возбудители коклюша и паракоклюша. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
  • 92. Возбудители туберкулеза. Таксономия и характеристика. Условно – патогенные микобактерии. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
  • 93. Актиномицеты. Таксономия. Характеристика. Мик­робиологическая диагностика. Лечение.
  • 95. Возбудитель хламидиозов. Таксономия. Характеристи­ка. Микробиологическая диагностика. Лечение.
  • 96.Возбудитель сифилиса. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
  • 97. Возбудитель лептоспирозов. Таксономия. Характери­стика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика. Лечение.
  • 98. Возбудитель боррелиозов. Таксономия. Характерис­тика. Микробиологическая диагностика.
  • 99. Клиническая микробиология, ее задачи. Вби, особенности причины возникновления.Роль условно – патогенных микроорганизмов в возникновении внутрибольничных инфекций.
  • 100. Классификация грибов. Характеристика. Роль в патологии. Лабораторная диагностика. Лечение.
  • 101. Классификация микозов. Поверхностные и глубокие микозы. Дрожжеподобные грибы рода кандида. Роль в патологии человека.
  • 102. Возбудитель гриппа. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилакти­ка и лечение.
  • 103. Возбудитель полиомиелита. Таксономия и характери­стика. Лабораторная диагностика. Специфическая про­филактика.
  • 104. Возбудители гепатитов а и е. Таксономия. Характе­ристика. Лабораторная диагностика. Специфическая про­филактика.
  • применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких боль­ных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными, одновалент­ными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса. Для этого в систему антирезусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобули­нов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют патологические состо­яния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например ге­молитическую болезнь новорожденных: эрит­роциты резус-положительного плода соединя­ются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые пере­шли через плаценту от резус-отрицательной матери.

    Механизм . Сложность выявления неполных (моновалентных) антител связана с тем, что эти антитела, связываясь с эпитопами специфического антигена, не образуют структуру решетки и реакция между антигенами и антителами не выявляется ни агглютина­цией, ни преципитацией, ни другими тестами. Для выявления образовавшихся комплексов антиген - антитело приходится ис­пользовать дополнительные тест-системы. Для выявления непол­ных антител, например к резус-антигену эритроцитов в сыворот­ке крови беременной женщины, реакция ставится в два этапа: 1) к двукратным разведениям испытуемой сыворотки добавляют эритроциты, содержащие резус-антиген, и выдерживают при 37 °С в течение часа; 2) к тщательно отмытым после первого этапа эритроцитам добавляют кроличью античеловеческую анти-глобулиновую сыворотку (в заранее оттитрованном рабочем раз­ведении). После инкубации в течение 30 мин при 37 °С резуль­таты оценивают по наличию гемагглютинации (положительная реакция). Необходимо ставить контроль ингредиентов реакции: 1) антиглобулиновая сыворотка + заведомо сенсибилизирован­ные специфическими антителами эритроциты; 2) обработанные нормальной сывороткой эритроциты + антиглобулиновая сыво­ротка; 3) обработанные исследуемой сывороткой резус-отрица­тельные эритроциты + антиглобулиновая сыворотка.

    50. Реакция пассивной гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.

    Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использова­нии эритроцитов (или латекса) с адсорбиро­ванными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соот­ветствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеива­ние и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.

    Компоненты. Для постанов­ки РНГА могут быть использованы эритроциты барана, лошади, кролика, курицы, мыши, человека и другие, которые заготавли­вают впрок, обрабатывая формалином или глютаральдегидом. Ад­сорбционная емкость эритроцитов увеличивается при обработке их растворами танина или хлорида хрома.

    Антигенами в РНГА могут служить полисахаридные АГ микро­организмов, экстракты бактериальных вакцин, АГ вирусов и риккетсий, а также другие вещества.

    Эритроциты, сенсибилизированные АГ, называются эритроцитарными диагностикумами. Для приготовления эритроцитарного диагностикума чаще всего используют эритроциты барана, обла­дающие высокой адсорбирующей активностью.

    Применение . РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гор­мона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительнос­ти к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях.

    Механизм . Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) отличается значительно более высокой чувствительностью и специфич­ностью, чем реакция агглютинации. Ее используют для иденти­фикации возбудителя по его антигенной структуре или для индикации и идентификации бактериальных продуктов - токси­нов в исследуемом патологическом материале. Соответственно используют стандартные (коммерческие) эритроцитарные анти­тельные диагностикумы, полученные путем адсорбции специфи­ческих антител на поверхности танизированных (обработанных танином) эритроцитов. В лунках пластмассовых пластин готовят последовательные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят одинаковый объем 3 % суспензии на­груженных антителами эритроцитов. При необходимости реакцию ставят параллельно в нескольких рядах лунок с эритроцитами, нагруженными антителами разной групповой специфичности.

    Через 2 ч инкубации при 37 °С учитывают результаты, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при отри­цательной реакции появляется осадок в виде компактного.диска или кольца на дне лунки, при положительной реакции - харак­терный кружевной осадок эритроцитов, тонкая пленка с неров­ными краями.

Принцип антиглобулинового . Антиэритроцитные антитела неполного типа и молекулы комплемента (С), находящиеся на поверхности эритроцитов выявимы - прямой тест - их агглютинацией в контакте с животной сывороткой, содержащей антитела на человеческий антиглобулин (антиглобулиновая сыворотка). Свободные в сыворотке неполные антитела выявляются - косвенный тест - их закреплением на смеси нормальных эритроцитов группы 0, все антигены которых принадлежат известной резус-системе, далее агглютинируемые под воздействием антиглобулиновой сыворотки.

Материалы, реагенты антиглобулинового теста Кумбса : пробирки на 10/100 мл; градуированные пипетки на 1, 2 мл; пастеровские пипетки; штативы; предметные нешлифованные стекла; 8,5‰ раствор NaCl; эритроциты. Эритроциты больного, равно как и принадлежащие к группе 0 получим из свежеотобранной крови на противосвертывающем веществе (раствор ЭДТА).

Эритроциты группы 0 отобрать с таким расчетом, чтобы они исходили от лиц в норме и содержали все антигены резус-системы . Их можно сохранять до 7 дней в аутологической плазме, при температуре + 4°С. В случае отсутствия эритроцитов группы 0, известной антигенной мозаики, можно использовать смесь эритроцитов группы 0, резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.

Сыворотка больного должна быть свежеотобранной.

Антиглобулиновая сыворотка производится институтом им. д-ра И. Кантакузино, выпускается в лиофилизированном виде в содержащих 1 мл ампулах. После растворения сыворотку хранить при температуре -20°С.

Техника антиглобулинового теста Кумбса :
а) Прямой тест Кумбса : эритроциты больного промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl.
На несколько предметных стекол нанести по крупной капле из разведений антиглобулиновой сыворотки, а рядом - по маленькой капле из осадка эритроцитов больного; перемешать капли углом стекла. Приготовленный материал оставить на столе 5 мин., затем исследовать на наличие агглютинатов. В случае положительного результата определить максимальный агглютинирующий титр.

б) Косвенный тест Кумбса : эритроциты группы 0, резусположительные и резус-отрицательные промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl и подвергнуть воздействию сыворотки больного из расчета 2 капли эритроцитов на 8-10 капель сыворотки, затем, в течение 60 мин., провести инкубацию при температуре 37°С. После этого снова трижды промыть эритроциты и воздействовать на них антиглобулиновой сывороткой, по указаниям для прямого теста Кумбса.

Когда речь идет о холодовых активных антителах сенсибилизацию эритроцитов группы 0 провести 60 мин. при температуре + 4°С.

Примечание : 1) Не проводить прямой тест Кумбса на эритроцитах, сохраненных один или несколько дней при температуре + 4°С или комнатной температуре, поскольку результаты могут оказаться ложноположительными за счет фиксации имеющихся в нормальной сыворотке непол ных, активных на холоде антител. 2) В случаях выраженной гиперпротеинемии промывать эритроциты 4-5 раз и проверить отсутствие сывороточных белков в последней промывной жидкости, с помощью сулфосалициловой кислоты.

Возможный остаток 2 мкг IgG/мл в эритроцитном осадке может нейтрализовать антиглобулиновую сыворотку . Тест Кумбса можно проводить и с помощью моноспецифических анти-IgG, -IgM, -IgA -С3 и -С4 сывороток в целях уточнения вида, находящихся на поверхности эритроцитов глуболин, например, у страдающих аутоиммунной гемолитической анемией.